INVESTIGADORES
GIRI Adriana Angelica
congresos y reuniones científicas
Título:
Evaluación de un ensayo de detección del ARN-HCV para el tamizaje molecular de donantes.
Autor/es:
PEREZ, GERMÁN R.; MAIDANA, FERNANDA V; TABORDA, MIGUEL A.; GARDIOL, DANIELA; RUZZINI, MARCELA; GIRI, ADRIANA A
Lugar:
Buenos Aires
Reunión:
Congreso; X Congreso Argentino de Virología, III Simposio de Virología Clínica y I Simposio de Virología Veterinaria; 2011
Institución organizadora:
Asociación Argentina de Microbiología
Resumen:
El
desarrollo y la aplicación de pruebas ultrasensibles y específicas para
el tamizaje serológico de donantes han reducido drásticamente
transmisión de infecciones virales por transfusión. Sin embargo, el
Virus de la Hepatitis C (HCV) sigue siendo el virus con mayor riesgo
residual de infección por transfusión por el prolongado período ventana
serológico (69 días). En Argentina, la implementación de la Tecnología
de Amplificación de Ácidos Nucleicos (NAT) en el ámbito público está
retrasada por los costos de los test comerciales, por la falta de
desarrollos biotecnológicos regionales, el retraso de regulaciones
locales para el NAT de donantes y la falta de laboratorios
centralizadores.En nuestro laboratorio se desarrolló el ensayo
RT-PCR/CIC HCV con un formato operativo, no requiere instrumental ni
reactivos sofisticados, detecta todos los genotipos circulantes en
Argentina e incluye un Control Interno Competitivo (CIC) estable. En
este trabajo se presenta la validación del ensayo RT-PCR/CIC HCV como
sistema NAT en muestras individuales de plasma bajo los lineamientos del
Instituto Paul Ehrlich.Para determinar el límite de detección y la
sensibilidad analítica del ensayo, se utilizó el Estándar Internacional
de ARN del HCV (EIHCV) de la OMS (código 96/798). El EIHCV
fue diluido en plasma negativo en 2.000, 200, 100, 50, 20 UI/reacción.
Se analizaron 20 repeticiones de cada concentración en 5 días diferentes
para minimizar el efecto de los errores de manipulación. La extracción
de los ARN (HCV y CIC) se realizó a partir de 150 μl plasma con un
sistema comercial (NucleoSpin RNA Virus, Macherey-Nagel). La positividad
o negatividad de los resultados se determinó en base al valor de corte
establecido como 2 veces la media de las densidades ópticas a 450 nm de
los controles negativos utilizados en cada experimento.Se realizó un
análisis de progresión probit con la proporción de resultados positivos
de cada réplica de 20 en relación a las concentraciones
correspondientes para determinar la mínima cantidad detectable con un
intervalo de confianza continuo de 95% (IC95%) en el rango probado. El
ensayo RT-PCR/CIC HCV como sistema NAT arrojó un límite de detección de 5
UI/reacción y una sensibilidad analítica de 79 UI/reacción (IC95%: 59,0
136,6 UI/reacción). La sensibilidad clínica se evaluó en 101 muestras
de plasma en doble ciego procedentes del Servicio de Hemoterapia
(Hospital Provincial del Centenario) rechazadas para transfusión por
poseer algún marcador serológico positivo o por autoexclusión. Se
obtuvieron 7/101 (6.9%) muestras reactivas por NAT según el valor de
corte. La única muestra con serología reactiva (1/101) fue detectada por
NAT. No se detectaron inhibiciones en la reacción. Los individuos con
NAT detectable/Acs a-HCV No reactivos han sido citados para confirmar o
descartar la eventual infección en periodo ventana por HCV.En conclusión, los resultados preliminares mostraron un desempeño satisfactorio del ensayo en evaluación.