EVALUACIÓN DE APTÁMEROS ESPECÍFICOS CONTRA LA PROTEÍNA DE LA NUCLEOCÁPSIDE (N) DE SARS-COV-2 PARA EL DESARROLLO DE UN TEST RÁPIDO DE DETECCIÓN DE LA INFECCIÓN.

GARCÍA REY, JULIETA; BELLANDI, TOMÁS; BOLATTI, ELISA M; CERRI, AGUSTINA; CHOUHY, DIEGO; GIRI ADRIANA A

Asunción

Jornada; XXX JJ Investigadores AUGM-UNA; 2023

Asociación de Universidades "Grupo Montevideo"

Desde la identificación del coronavirus pandémico SARS-CoV-2, se han realizado esfuerzos para desarrollar y producir pruebas diagnósticas que permitan detectar tempranamente la infección viral.Los aptámeros son moléculas de ADN o ARN simple hebra con estructura tridimensional específica que pueden unirse con alta afinidad y especificidad a una amplia gama de moléculas y su producción requiere una infraestructura más sencilla y económica que la necesaria para producir anticuerpos monoclonales (AcM).En este trabajo se propone la expresión y purificación de la proteína N recombinante de SARS-CoV-2 para evaluar la capacidad de unión de 5 aptámeros reportados en bibliografía que podrán ser utilizados en el futuro como sensores moleculares en técnicas cromatográficas. La expresión de la proteína N y su dominio de unión a ARN (RBD) se optimizó utilizando 12 condiciones de inducción con diferentes concentraciones de IPTG, tiempos y temperaturas de incubación logrando concentraciones aproximadas de 10 mg/ml. La purificación de las proteínas se realizó con esferas de sepharosa que permiten medir la intensidad de fluorescencia del complejo Aptámero-Proteína utilizando citometría de flujo. Se calculó la constante de disociación (Kd) como medida de afinidad.De los aptámeros evaluados, se seleccionaron dos con los valores más bajos de Kd A-61 (22.34 nM) y A-15 (20.8 nM) y se realizaron pruebas de competencia para determinar si éstos mostraban afinidad por diferentes regiones de la proteína.Los resultados confirmaron que A-61 y A-15 no competían por el mismo sitio de unión, indicando que son candidatos prometedores para su implementación en el desarrollo y optimización de una prueba de cromatografía lateral para el diagnóstico del SARS-CoV-2.