Inmovilización de un cultivo mixto de bacterias antárticas para su uso en biorremediación de suelos contaminados con gasoil

NIZOVOY P; RUBERTO L.; MINETTI R; FIGUEROLA E; MACAÑO H; MAC CORMACK W.P; VAZQUEZ SC

Santos

Workshop; XXI ALAM Congreso latinoamericano de Microbiología - Ier Workshop Sudamericano de Microbiología Polar; 2012

Sociedade Brasileira de Microbiología

Encarar los problemas de contaminación por hidrocarburos en las bases antárticas implica la puesta a punto de estrategias factibles de ser aplicadas en clima frío y que a la vez respeten las regulaciones del Tratado Antártico. La inoculación con bacterias autóctonas con capacidad degradadora en laboratorio no garantiza su éxito en el terreno, llevando a que la estrategia de bioaumento a veces no reporte mejoras en el saneamiento. Una alternativa para enfrentar las dificultades de establecimiento y sobrevida de las bacterias es su inmovilización a distintos soportes. En este trabajo se estudió la inmovilización de una mezcla definida de aislamientos, obtenidos de suelos antárticos crónicamente contaminados con gasoil, en copos de quitina (C), humus artificial (H), suelo prístino (S) y turba micronizada (T), bajo la hipótesis de que estas bacterias, al ser cultivadas in vitro y luego inoculadas (adecuadamente inmovilizadas en soportes) pueden vencer la competencia y predación y sobrevivir en el suelo, actuando en conjunto con la microbiota autóctona para degradar hidrocarburos. Se identificaron por DGGE y RAPD los aislamientos que lograron inmovilizarse a las diferentes matrices, observando al SEM la formación o no de biofilms y evaluando la estabilidad de los recuentos de viables en el tiempo al almacenar las matrices a 4°C por un año. Luego se ensayó en microcosmos la capacidad de la mezcla, una vez inmovilizada en los diferentes soportes, de establecerse en un suelo antártico contaminado de forma aguda con gasoil y de contribuir a la degradación del contaminante. Se siguieron los recuentos de bacterias totales y degradadoras y se midió el contenido de hidrocarburos (TPH) remanentes por IR y GC-FID. El almacenamiento a 4ºC por un año produjo disminución de los recuentos en un orden de magnitud en las matrices S, C y T y en tres órdenes en H. Solo en C se observaron biofilms. En H y S se evidenciaron algunas estructuras similares, cuya matriz podría recubrir a las bacterias. La identificación por RAPD mostró que en T, C y S un solo aislamiento no se estableció, mientras que en H se recuperaron dos. Por DGGE se vio que en T se produjeron cambios al cabo de un año. En el ensayo en microcosmos no hubo diferencias en los recuentos de los sistemas con inóculo y los controles (con y sin bioestimulación). La relación de bacterias degradadoras/totales fue similar en todos los casos, sugiriendo que la microbiota nativa estaría ya adaptada (reaccionando rápido al agregar nutrientes y airear el suelo) por encontrarse en una zona de tránsito de vehículos y donde hay caños de transporte de combustible. No hubo grandes diferencias en el contenido de TPH de los sistemas inoculados y los controles. Los perfiles de GC-FID mostraron eliminación pareja de las fracciones livianas, atribuible a factores abióticos. No obstante, los controles y el sistema con T mostraron mayor eliminación de dichas fracciones, con presencia de picos de mayor tiempo de retención que podrían corresponder a metabolitos de degradación. El estudio de la comunidad bacteriana en los sistemas permitirá confirmar que el inóculo pudo servir para agilizar el proceso de degradación, lo cual constituye un aspecto clave a tener en cuenta al elegir una estrategia de biorremediación.