Contribution of individual tryptophan residues to the spectroscopic and functional properties of Escherichia coli Ą-hemolysin

V. HERLAX; L. BAKÁS

Tucumán

Congreso; Reunión XXX de SAB; 2001

SAB ( Sociedad Argentina de Biofisica)

   Alfa- hemolisina es una toxina proteica secretada por alguna cepas patógenas de E. coli.Detalles adicionales de la interacciones lípido- proteína pueden ser obtenidas a paritir de estudios de espectroscopía de fluorescencia.HlyA tiene cuatro residuos triptófanoW) localizados en las siguientes posiciones de su secuencia: 432, 480, 579 y 914. En estudios previos hemos encontrado que por interacción de HlyA con vesículas lipídicas, existe un aumento en la intensidad de la fluorescencia intrínseca de la proteína, con un desplazamiento al azul del máximo de emisión.Con la finalidad de identificar la pegión de la proteína que interacciona con la membrana, se diseñaron mutantesen los cuales se reemplazó, por mutagenesis dirigida, uno de los residuos de W por el residuo no fluorescente leucina (L).Los espectros de estas proteínas mutantes indican que estas mutaciones no producen cambios en la estructura de la proteína.La comparación de los espectros de la proteína nativa y los cuatro mutantes indican que procesos de transferencia de enrgía tiene lugar, por lo que el espectro de la proteína nativa no puede calcularse como la suma de las contribuciones de cada uno de los W presentes.Paralelamente, se realizaron estudios de oxidación de los W expuestos al solvente con N- Bromosuccinimida y medidas de transferencia de energy desde W al laurdan incorporado en membranas. Estos resultados indican que no existe un residuo crítico en la interacci´´on de HlyA con la membrana, pero sin embargo estos pueden estar involucrados en interacciones proteína-proteína, como los que tiene lugar en la interacción de Hly con receptores proteícos necesarios para la actividad citotóxica.