Clonado y caracterización de cDNA de Glutatión-S-transferasa de la respuessta defensiva de Fragaria x ananassa frente al asilado M23 de Colletotrichum sp.

TONELLO, URSULA; CASTAGNARO, ATILIO PEDRO; DÍAZ RICCI, JUAN CARLOS

Tafí del Valle. Tucumán

Jornada; 24º Jornadas Científicas de la Asociación de Biología de Tucumán; 2007

Luego del reconocimiento de potenciales patógenos, las plantas responden con la rápida generación de moléculas señales, que posteriormente llevan a la expresión de los genes relacionados a la defensa. Entre las moléculas que actúan como señales se encuentran las especies reactivas de oxígeno (ERO), que además tienen efecto tóxico sobre los componentes de las células como proteínas, lípidos y ADN. Las glutatión S-transferasas (GSTs) son proteínas citoplasmáticas compuestas por dos subunidades polipeptídicas que contienen sitios activos de unión al glutatión y a ligandos hidrofóbicos. Se ha propuesto que estas moléculas estarían involucradas en los procesos de detoxificación  al permitir que compuestos producidos por la acción de tóxicos endógenos y exógenos sean transportados a la vacuola para impedir su efecto deletéreo en la célula. El objetivo de este trabajo es el clonado y caracterización del cDNA de las GSTs expresadas durante la interacción incompatible entre Fragaria x ananassa con el aislado M23 de Colletotrichum sp. En trabajos previos, informamos que se había logrado clonar un fragmento de 230 pb obtenido por DD-RT-PCR a partir de RNA total extraído de hojas de frutilla infectadas con el aislado M23 de Colletotrichum sp. Su secuencia presentaba un 45-35 % de identidad con otras GSTs clase Tau de plantas. En este trabajo informamos los resultados obtenidos del estudio de los cDNA completos de las GSTs. Para esto se utilizó la técnica de RACE (Rapid Amplification of cDNAs Ends), que es una técnica basada en PCR, que permite el aislamiento de clones con los extremos 3’ y 5’ por medio de cebadores específicos diseñados a partir de la secuencia del fragmento antes reportado. Los resultados obtenidos, muestran que las secuencias de los clones obtenidos por RACE permitió por un lado, confirmar los resultados previos y por otro determinar que en la interacción incompatible en frutilla estarían involucradas varias GSTs que presentan una identidad de secuencia de aminoácidos entre 58 y 35% con distintas GSTs clase Tau en plantas. El alineamiento de las secuencias aminoacídicas usando Clustal X permitió establecer en el dominio N-terminal del polipéptido, la presencia de residuos de aminoácidos altamente conservados que constituyen el sitio G de unión a glutatión; en tanto que hacia el extremo C-terminal se encuentra el sitio H de unión a sustratos hidrofóbicos. La expresión de GSTs en la interacción incompatible en frutilla podría ser determinante en el establecimiento de la respuesta de defensa ya que estas moléculas han sido reportadas en las respuestas de las plantas a diferentes estreses bióticos y abióticos. Distintos miembros de esta numerosa familia de proteínas exhiben además actividades enzimáticas antioxidantes e interactúan con otras moléculas involucradas en los procesos mencionados, por lo que el estudio de sus funciones celulares aportará importantes conocimientos sobre los mecanismos de la respuesta de defensa en frutilla.