Activación parasimpática de células LMM3 derivadas de un adenocarcinoma mamario murino

LAURA RIMMAUDO; LILIA DAVEL; MARIA BARBARA REARTE; MARIA ELENA SALES

Mar del Plata, Provincia de Buenos Aires Argentina

Congreso; CONGRESO CONJUNTO DE SOCIEDADES BIOMEDICAS 2004; 2004

SAIC- SAI- SAFE-SAB-SABiofísica-SAF-SAN

El Sistema Nervioso Autónomo (SNA) regula diversas patologías como el Síndrome de Sjogrem, Enfermedad de Alzheimer y Chagas. Investigamos el papel del SNA parasimpático en el comportamiento biológico de células de la línea LMM3 derivada del adenocarcinoma mamario murino MM3. Caracterizamos la expresión de receptores muscarínicos (RM) en células LMM3 por ensayos de unión específica con el antagonista muscarínico tritiado bencilato de quinuclidinilo ([3H]-QNB). Los valores de los parámetros de unión, número máximo de sitios receptores (Bmáx: fmol/106 cel) y constante de afinidad (Kd:nM) fueron: Por ensayos de desplazamiento de [3H]-QNB con concentraciones crecientes de los antagonistas (AT), metoctramina (MET; selectivo RM2), pirenzepina (PIR; selectivo RM1) y 4-DAMP (selectivo RM3) observamos un orden de potencia que se corresponde con una expresión mayoritaria de RM2 (AT>MET>PIR>4-DAMP). Los RM son funcionales pues el tratamiento de las células con el agonista carbacol (CARB) estimula en forma concentración dependiente la proliferación celular medida por incorporación de [3H]-timidina (% estimulación con respecto al control sin tratamiento, siendo el efecto máximo de un 55±4 % (n=5) que se redujo por el pretratamiento con una concentración 10-5 M de AT, MET, PIR y 4-DAMP. Las células LMM3 inducen una potente respuesta angiogénica in vivo (n° vasos/mm2 piel; 3,96±0,4 n=6). El factor de crecimiento del endotelio vascular de tipo A (VEGF-A) es un marcador de neovascularización, por ello determinamos la expresión del mismo por Western blot y cuantificamos las bandas por densitometría (D.O./mm2). La expresión basal de VEGF-A (0,241) se duplica por el tratamiento de las células con CARB (0,421) y la preincubación con AT (0,213), 4-DAMP (0,295) o MET (0,300) redujo significativamente el efecto del CARB. Concluimos que las células LMM3 expresan RM funcionales y que la activación de los mismos promovería el crecimiento tumoral al estimular la proliferación celular y la angiogénesis