Apoptosis aumentada por tratamiento con globotriaosilceramida (Gb3) sobre células mononucleares de sangre periférica. Implicancias para la enfermedad de Fabry

DE FRANCESCO N; FOSSATI C; ROZENFELD P

Mar del Plata, Argentina

Congreso; LIV Reunión Científica Anual de la SAIC - LVII Reunión Anual de la SAI; 2009

Sociedad Argentina de Inmunología - Sociedad Argentina de Investigación Clínica

La globotriaosilceramida (Gb3) es un glicolípido neutro que se acumula en la Enfermedad de Fabry (EF), una enfermedad de almacenamiento lisosomal causada por la deficiencia genética X-ligada de la enzima lisosomal α-galactosidasa A. Los valores plasmáticos de Gb3 en pacientes con EF se hallan en el rango de 2 a 50 μM, mientras que en individuos sanos son menores a 1,2 μM. Resultados preliminares de nuestro grupo indicarían la existencia de un estado proapoptótico en células mononucleares de sangre periférica (PBMC) de pacientes con EF.En el presente trabajo se investiga los efectos del tratamiento con Gb3 sobre los niveles de apoptosis de PBMC normales.Partiendo de sangre periférica de sujetos normales, se aislaron PBMC mediante un gradiente de ficoll, y se cultivaron en presencia de Gb3 variando el rango de concentraciones de 0 a 40 μM, por 48 hs, y a una concentración fija de 20 μM por diferentes tiempos, hasta 48 hs. Posteriormente se procedió a analizar los niveles de apoptosis de estas células mediante las técnicas de Anexina-V y TUNEL por citometría de flujo. También se determinó el grado de despolarización de la membrana mitocondrial (DMM) mediante JC-1.En la cinética del tratamiento con Gb3 se observó un aumento en los niveles de apoptosis en linfocitos y monocitos, alcanzando los valores máximos a las 6 hs para Anexina-V y 48 hs para TUNEL.  Así mismo, el agregado de Gb3 produjo una DMM que fue máxima a las 6 hs. Los experimentos de dosis-respuesta con Gb3 mostraron una dependencia de los niveles de DMM y apoptosis en linfocitos y monocitos al aumentar la dosis.Estos hallazgos muestran un efecto directo de dosis patológicamente elevadas de Gb3 sobre la fisiología de las PBMC, lo que podría sugerir un vínculo causal con la apoptosis observada en PBMC de pacientes. La observación de la disrupción del potencial mitocondrial mediante JC-1 indicaría la activación de la vía intrínseca de apoptosis como mediadora de este proceso.