Un metodo sencillo para dosaje de globotriaosilceramida (Gb3) en sedimento urinario de pacientes con Enfermedad de Fabry

DE FRANCESCO N; FOSSATI C; ROZENFELD P

Mar del Plata, Argentina

Congreso; LV Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Inmunología - XII Reunión de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2007

Sociedad Argentina de Inmunología - Sociedad Argentina de Investigación Clínica

La enfermedad de Fabry es un desorden genético ligado al X, causado por la deficiencia de la enzima lisosomal alfa-galactosidasa-A, que produce la acumulación de globotriaosilceramida (Gb3) en diversos tejidos. En la actualidad, el tratamiento especifico consiste en el reemplazo enzimatico (ERT). La determinación de Gb3 en sedimento urinario es uno de los marcadores utilizados para evaluar la severidad y progresión de la enfermedad, asi como su tratamiento.El objetivo del presente trabajo es desarrollar un metodo sencillo de cuantificacion de Gb3 en el sedimento urinario de pacientes con Enfermedad de Fabry y evaluar su utilidad para seguimiento del tratamiento.Se incluyeron en el estudio 15 hemizigotas y 21 heterozigotas, la mitad de los cuales se encontraban en ERT. Alícuotas de 200 ml de orinas de 24 horas recolectadas por los pacientes y 10 controles sanos fueron centrifugadas. Los glicolipidos presentes en el sedimento urinario fueron extraidos con cloroformo- metanol y sometidos a una digestión alcalina; luego de lo cual fueron incubados con alfa-galactosidasa A y la cantidad de galactosa producida por la reaccion enzimatica sobre el Gb3 fue dosada por fluorometria. El resultado se expreso en nmoles de Gb3/orina de 24hs.Los valores de Gb3 determinados en las muestras de hemizigotas (723,03+488,69) y heterozigotas (231,56+102,93) fueron significativamente elevados (p=0,03 y p=0,01, respectivamente) con respecto a los de los controles (74,28+63,03). La cantidad de Gb3 en hemizigotas y heterozigotas en ERT (183,32+134,36 y 72,03+31,33, respectivamente) es significativamente menor que en los pacientes no tratados (p=0,005), mientras que no se observa diferencia significativa con los CN (p=0,15). Este sencillo metodo de dosaje de Gb3 resulta en una medida específica para el dosaje de Gb3 en muestras de pacientes con Enfermedad de Fabry. Tambien demostró ser de utilidad para el seguimiento de la terapia de reemplazo enziamtico, mostrando la reducción de los niveles de Gb3, a valores dentro del intervalo de referencia normal.