HEMOFILIA A (HA): INVERSE SHIFTING-PCR (IS-PCR) PARA DIAGNÓSTICO DE TODOS LOS PATRONES Y REARREGLOS GENÉTICOS ASOCIADOS A INT22H.

ROSSETTI LC, RADIC CP, LARRIPA IB, DE BRASI CD.

Mar del Plata, Argentina.

Congreso; LII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC).; 2007

Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC).

La HA es una coagulopatía ligada al sexo, causada por mutaciones en el gen del F8. Casi la mitad de las HA-severas están causadas por la inversión del intrón 22 (Inv22), mutación inusual originada por recombinación homóloga entre duplicones invertidos del X (int22h, 10-kb). Existen 3 copias de int22h: una en el intrón 22 (int22h-1) y otras 2, cerca del telómero Xq (int22h-2 e int22h-3), lo que permite 2 tipos de Inv22 (T1 y T2). Han sido hipotetizadas en la literatura, duplicaciones (no-causales de HA) y deleciones (causales de HA), aún no observadas clínicamente. Objetivos: validar y aplicar la técnica de IS-PCR en pacientes con HA-severa. El abordaje IS-PCR incluye 2 fases, (1) preparación de círculos a partir de fragmentos de restricción BclI, (2) análisis por PCR, subdividido en 2 ensayos, diagnóstico y complementario. Para validación se compararon resultados de IS-PCR con análisis por Southern blot que detecta los rearreglos y patrones de int22h; y con la técnica de PCR-inversa que sólo detecta la presencia de la Inv22. Se estudió un total de 109 individuos. En la validación IS-PCR vs Southern blot se estudiaron 32 individuos y se obtuvo una correlación perfecta: 18 varones (10 no-Inv22, 4 Inv22-T1 y 4 Inv22-T2) y 14 mujeres (6 no-Inv22, 4 portadoras Inv22-T1 y 4 portadoras Inv22-T2). También hubo perfecta concordancia entre IS-PCR y PCR-inversa en 43 individuos: 24 varones (11 no-Inv22, 13 Inv22: 11 T1 y 2 T2) y 19 mujeres (10 no-Inv22, 9 portadoras de la  Inv22: 7 T1 y 2 T2).  El sistema IS-PCR fue desafiado con 34 nuevos individuos: 20 varones (15 no-Inv22 y 5 Inv22-T1) y 14 mujeres (11 no-Inv22 y 3 portadoras Inv22-T1). El ensayo diagnóstico IS-PCR para la Inv22 es un método ideal para su incorporación en primera línea en el diagnóstico molecular de HA-severa. Su combinación con el ensayo complementario constituye una herramienta de screening poblacional para la investigación de los rearreglos de int22h sugeridos como posibles, pero aún no reportados.