ANÁLISIS DE LA INVERSIÓN DEL INTRÓN 22 DEL GEN DEL FVIII EN ARGENTINA: GENOTIPIFICACIÓN POR PCR INVERSA.

ROSSETTI LC, RADIC P, LARRIPA IB, DE BRASI CD.

Mar del Plata, Argentina.

Congreso; 50 Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC); 2005

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

La hemofilia A (HA) es una coagulopatía hereditaria, ligada al cromosoma X, causada por defectos en el gen del factor VIII (F8). La inversión del intrón 22 (Inv22) constituye la mutación más frecuente en HA severa (42%). El objetivo de este trabajo es presentar el nuevo abordaje de análisis de la Inv22 aplicado al estudio de familias argentinas con HA severa (HAS). La metodología de PCR-inversa (PCR-I) incluye: (1) la restricción con BclI de las muestras de DNA genómico, (2) la ligación en gran volumen (600ul) de los fragmentos BclI (autoligado) para obtener círculos-B y (3) el análisis de los círculos-B por PCR standard multiplex (primers IU, ID y ED). Los círculos-B correspondientes al fragmento del gen del FVIII intacto (21,5kb) rinden una señal de 487bp, mientras que los círculos quiméricos (20kb) asociados a la Inv22, 559bp. Fueron estudiados 2 grupos de muestras de familias con HAS: (a) 16 individuos previamente estudiados por Southern blot (8 probandos, 5 de ellos Inv22 positivos; y 8 mujeres, 3 de ellas portadoras de la Inv22) para validación del nuevo abordaje y (b) nuevos casos clínicos de 13 familias no estudiadas previamente. En el grupo (a) el análisis por PCR-I indicó una correlación perfecta con el método clásico. En el grupo (b) se diagnosticó la Inv22 como la mutación causal en 8 familias (6 probandos, y 2 portadoras) donde además pudieron detectarse 4 portadoras de la inversión en 7 familiares en riesgo (3 madres y 1 tía Inv22 [+/-], 1 hermana y 2 primas Inv22 [-]). Incluyendo los nuevos casos, la frecuencia actual de la Inv22 en HAS es 32/76 (42%) y el riesgo de desarrollo de inhibidor observado en toda nuestra serie Argentina con HAS (24/75, 32%), no difiere de la estimada para los casos Inv22 positivos (10/32, 31%). Las frecuencias y riesgos de inhibidor observados coinciden con la literatura internacional. El abordaje de PCR-I/Inv22 resulta ideal para ser incorporado en primera línea, ya que proveerá información segura en el 42% de las familias con HA severa.