HEMOFILIA A (HA) Y B (HB) ASOCIADA A MUTACIONES SOBRE BASES CONSENSO DE SPLICING: ANÁLISIS IN SILICO

CLAUDIA P. RADIC; LILIANA C. ROSSETTI; IRUPE SZURKALO; IRENE B. LARRIPA; CARLOS D. DE BRASI

Pergamino

Congreso; Sociedad Argentina de Genetica; 2008

Sociedad Argentina de Genetica

HA y HB son coagulopatías ligadas al X, causadas por mutaciones deletéreas en el F8 y F9.  Aproximadamente 4% de las HA y 9% de las HB, corresponden a defectos de splicing. Debido a las dificultades prácticas para el análisis directo de los defectos de splicing sobre muestras de RNA leucocitario, el objetivo fue aplicar el análisis teórico-computacional (programas accesibles en-línea) a las mutaciones observadas como únicos cambios potencialmente causales en pacientes hemofílicos, afectando las regiones exón/intrón y estimar su utilidad en los laboratorios de genética molecular clínica. DNA genómico leucocitario de 104 HAs y 32 HBs, fue sometido a screening de mutaciones por CSGE (conformation-sensitive gel electrophoresis) de alta resolución (37 amplímeros para HA y 12 para HB) y secuenciación DNA. Tres pacientes (2.9%) con HA y 5 con HB (15.6%) presentaron cambios nucleotídicos en límites exón-intrón. En HB: (1) g.118delGTTT, (2) g.117G>A, (3) g.6491T>G, (4) g.6676A>G, (5) g.10506insT. En HA: (6) c.602-32A>G, (7) c.611-1 G>A , (8) c.6273G>A. En la literatura se reportadon como posibles defectos de splicing, sólo 3 de estos 5 casos de HB y ninguno de los 3 de HA. Análisis in-silico: 7/8 cambios en NNSplice, 4/8 en NetGene2, 3/8 en Softbery-SPL, 5/8 en SPLM y 3/8 en GeneSplicer indicaron modificaciones significativas con disminución de scores de los sitios dadores o aceptores de splicing mutados respecto de los normales. Aunque no concluyentes hasta su confirmación por análisis directo, estos resultados permiten estimar que los cambios encontrados sí estarían afectando el splicing del F8 y F9.