DESARROLLO Y OPTIMIZACIÓN DE UN MÉTODO PARA AISLAR RETROTRANSPOSONES EN ALLIUM SATIVUM L.

YAÑEZ SANTOS, A; GIMÉNEZ, M D; PAZ, R C; GARCÍA LAMPASONA, S

Bariloche

Congreso; XLIII CONGRESO ARGENTINO DE GENÉTICA IV REUNION REGIONAL SAG-LA PAMPA PATAGONIA; 2014

Sociedad Argentina de Genética

El cultivo in vitro empleado para obtener plantas de ajo libres de virus provoca variación somaclonal. Una de las posibles causas de dicha variación podría resultar de la activación de retrotransposones. Actualmente el estudio de estos elementos genéticos móviles en ajo es limitado debido a que existe poca información del genoma de esta especie. En estudios previos llevados a cabo por nuestro grupo, a partir de geles de poliacrilamida de MSAP (Methylation-Sensitive Amplified Polymorphism), logramos aislar y secuenciar 3 fragmentos que presentaron homología con dominios conservados de proteínas estructurales de retrotransposones del orden LTR, Superfamilia Ty3-gypsy. Las mismas presentaron longitudes de 304, 223 y 301 pb y se identificaron como RNasa H, retrotranscriptasa (RT) e integrasa (INT) respectivamente. El objetivo de este trabajo fue desarrollar un método basado en PCR que permita detectar la expresión de genes de retrotransposones e identificar la secuencia de dichos elementos. Para ello, se realizaron alineamientos de secuencias obtenidas y de transposones homólogos que permitieron detectar las regiones más conservadas a nivel nucleotídico y proteico. Cebadores de secuencia idéntica a las regiones codificantes de los sitios activos de las enzimas se emplearon para la amplificación por PCR del cDNA. Los resultados revelaron la presencia de fragmentos de diferente longitud, entre 700 ? 1500 pb. Estos productos de amplificación, indicarían que diferentes transposones se estarían expresando activamente en el ARNm de plantas de ajo.