Participación de PKC y MAPK en la acción no genómica de progesterona

CUTINI P.; SELLÉS J.; MASSHEIMER V.

Congreso; 50 Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC); 2005

Hemos demostrado que, en tejido aórtico de rata, la Progesterona (Pg) estimula en forma no genómica la actividad óxido nítrico sintasa (NOS) y activa el sistema PLC/DAG. Siendo la NOS una enzima regulada por calcio y fosforilación, en este trabajo investigamos la participación de estos eventos en el mecanismo de acción rápida de Pg. Empleamos anillos de aorta aislados de ratas hembras fértiles, tratados in vitro (1-15 min) con Pg. Usando ensayos de fosforilación de sustrato específico, estudiamos la regulación por Pg de la PKC y MAPK. Tratamientos de 5 min. con 1-100nM Pg estimulan significativamente la actividad MAPK (156 ± 8.9 vs 245 ± 29 cpm/mg prot/min, control vs 10nM Pg). Se demostró también que la hormona (1-100nM) estimula a actividad PKC a los tiempos ensayados, obteniendo un marcado estímulo a los 5 minutos de tratamiento (2.06 ± 0.38 vs 13.95 ± 2.05 pmol Pi/mg prot/min, control vs 10nM Pg), perfil temporal semejante al obtenido previamente para cambios en DAG. Para evaluar la participación del calcio extra e intracelular sobre la actividad NOS regulada por Pg, empleamos un antagonista de canales de calcio (verapamil 10μM), y los compuestos thapsigargin (TG 1μM), y ácido ciclopiazónico (ACP 10mM). El estímulo sobre la síntesis de NO se suprime en presencia de verapamil (1.46 ± 0.03 vs 0.59 ± 0.20, Pg vs Pg+verapamil; control= 0.56 ± 0.11 pmol NO/mg prot), sugiriendo la participación del influjo de calcio del medio extracelular. Cuando se realizó el ensayo en un medio libre de calcio, y se provoca la liberación de calcio de depósitos con TG + ACP, y posterior tratamiento con la hormona, el estímulo sobre la actividad NOS se reduce de 160 % a 45 % sobre el control (p menor a 0.01), suponiendo que la liberación de calcio de pooles endógenos también contribuiría a la acción del esteroide. Concluimos que el mecanismo no genómico de Pg a nivel vascular involucra la participación del sistema mensajero del calcio, MAPK y PKC.