Modulation of prtL gene expression of Lactobacillus delbrueckii subsp lactis CRL 581 depends on the peptide supply of the growth medium

ESPECHE TURBAY, B; SAVOY DE GIORI, G.; HÉBERT E

San Miguel de Tucumán, Argentina

Simposio; III Simposio Internacional de Bacterias Lácticas. Segundo encuentro Red BAL Argentina; 2009

CERELA

Las bacterias lácticas (BAL) son microorganismos clasificados como GRAS, por lo cual son muy empleados dentro de la industria alimentaria. Las BAL son bacterias exigentes desde el punto de vista nutricional, por lo cual para crecer en leche requieren un complejo sistema enzimático. Este sistema proteolítico se encuentra formado por una enzima clave la proteasa (Prt), enzimas transportadoras de péptidos, y un grupo de enzimas intracelulares que dan lugar a los aminoácidos esenciales que requiere la bacteria para crecer. Lactobacillus delbrueckii subsp.lactis CRL 581, es una BAL termófila usada como cultivo iniciador en la elaboración de quesos de pasta dura. Estudios previos mostraron que la expresión de la Prt es mayor en medios con bajas concentraciones de aminoácidos; y que la acción de la esta enzima sobre la caseína, principal proteína de la leche, da lugar a la formación de péptidos con diferentes actividades biológicas (antihipertensiva, y antimutagénica). El objetivo de este trabajo fue evaluar la expresión de la PrtL desde un punto de vista fisiológico, y correlacionarlo con un estudio molecular empleando Real Time-PCR (RT-PCR). Para ello L. lactis CRL 581 fue activada en MRS caldo, cosechada y lavada con solución fisiológica, y luego inoculada en tres medios diferentes: MRS, medio químicamente definido (CDM), y CDM adicionado de 10% de casitona; e incubada a 40ºC hasta alcanzar fase exponencial en donde la expresión de la Prt es máxima. Las células se cosecharon y se midió la actividad Prt utilizando el sustrato cromogénico Succynil-Ala-Ala-Pro-Phe-pNA (S-Ala), y confirmada mediante degradación de b-caseína por SDS-PAGE. El estudio de la expresión del gen que codifica para Prt (prtL) fue realizado empleando RT-PCR con primers específicos. Ambos estudios fisiológico, y molecular, demostraron una mayor expresión de la PrtL en CDM, con lo cual confirmamos que esta enzima se expresa en condiciones bajas de aminoácidos libres. La correlación entre el estudio fisiológico y molecular empleando RT-PCR, permitiría un análisis más rápido y sensible de la expresión del gen prt, en diferentes cepas de BAL. Esto permitiría relacionar su capacidad proteolítica, de importancia para la industria alimentaria, por su contribución a los aspectos reológicos y organolépticos de los productos fermentados, como la producción de péptidos bioactivos.