OBTENCIÓN DE CONSORCIOS DEGRADADORES DE HIDROCARBUROS PARA LA DETECCIÓN DE MARCADORES FUNCIONALES DE DEGRADACIÓN EN SEDIMENTOS CONTAMINADOS

FERNÁNDEZ NICOLÁS; ZULUETA M; MORELLI I. S.; MADUEÑO, L.

CABA

Congreso; XV Congreso Argentino de Microbiología (CAM 2019); 2019

CAM, SAMIGE, CAMA

Introducción: La Recuperación Natural Monitoreada (RNM) es una estrategia de remediación que aprovecha los procesos fisicoquímicos que ocurren en el ecosistema y las capacidades naturales de la población microbiana autóctona de degradar los contaminantes. Evidenciar la capacidad potencial de degradación en la comunidad microbiana autóctona mediante la presencia de bacterias y/o genes degradadores es indispensable en los estudios de factibilidad de la RNM, siendo un buen modelo de estudio los consorcios microbianos degradadores naturalmente seleccionados, debido a que aumentan la proporción de microorganismos degradadores y con ello su detección. Objetivos: Obtener consorcios degradadores de hidrocarburos a partir de sedimentos de agua dulce contaminados, evidenciar su diversidad por técnicas de clásicas de cultivo y moleculares, y determinar la presencia de bacterias y genes vinculados con la degradación. Materiales y métodos: Dos muestras de sedimentos de un curso de agua dulce contaminado con hidrocarburos y de diferente profundidad (20 y 40 cm) se inocularon en medio mineral (MM) líquido con fenantreno u octadecano como única fuente de carbono y energía (FCE). A los 10 días una alícuota fue repicada en medio fresco y este proceso se repitió tres veces hasta obtener los consorcios. A partir de los consorcios obtenidos se determinó el fenantreno/octadecano remanente (HPLC y GC), se realizaron recuentos en R2A, en MM sólido con fenantreno como única FCE, NMP de degradadoras de octadecano, extracciones de ADN total y PCR-DGGE. Se aislaron microorganismos de los consorcios, se les extrajo de ADN y se secuenció el gen 16S rRNA. Con todas las muestras de ADN obtenidas de realizó PCR utilizando cebadores que amplifican genes funcionales de diferentes géneros bacterianos. Resultados: Se lograron obtener dos consorcios degradadores de octadecano (P20O, P40O) y dos de fenantreno (P20F, P40F) que lograron eliminar alrededor de 50% y 99% de fenantreno y octadecano respectivamente. Diferencias observadas en la diversidad de colonias y en los perfiles de bandas de PCR-DGGE mostraron consorcios estructuralmente diferentes, obteniendo en el consorcio P20O el perfil más diverso, y en P20F el mayor número de microorganismos aislados (15). A partir de P20F se lograron aislar los microorganismos {SPHINGOMONAS} sp., {PSEUDOMONAS} sp. y {ALCALIGENES} sp. Mediante PCR se lograron detectar la presencia de los genes alcano-1-monooxigenasa, 2,3 catecol dioxigenasa, 1,2 naftaleno dioxigenasa en el ADN de los consorcios y en algunos de los cultivos aislados.Conclusión: Las estructuras microbianas diferentes obtenidas en los cuatro consorcios, el aislamiento de microorganismos potencialmente degradadores y la detección de genes funcionales muestran que los cultivos de enriquecimiento obtenidos a partir del sedimento de interés podrían ser útiles para la selección de marcadores funcionales aplicables durante un proceso de RNM.