El ácido ursodeoxicólico bloquea la inhibición de la captación de calcio producida por deoxicolato de sodio en enterocitos maduros

MARCHIONATTI AM; RODRÍGUEZ VA; RIVOIRA M; PEREZ A; TOLOSA DE TALAMONI N

Sierra de la Ventana

Congreso; XXXII Reunión Anual AAOMM; 2015

Los ácidos biliares (AB) primarios son sintetizados en el hígado a partir del colesterol y transportados al intestino donde por acción enzimática de la flora intestinal se transforman en secundarios. El ácido deoxicólico o su sal sódica el deoxicolato de sodio (NaDOC) es el principal AB secundario en humanos. En el colon, también por acción bacteriana, se forma el ácido ursodeoxicólico (UDCA), considerado AB terciario. En trabajos previos de nuestro laboratorio se demostró que el NaDOC inhibe la absorción intestinal de Ca+2 mediante estrés oxidativo y desencadenamiento de la vía intrínseca de la apoptosis (Rivoira y col., Comp. Biochem. Physiol., 2012), mientras que el UDCA favorece la absorción intestinal de Ca+2 (Rodríguez y col., Archives of Biochem. Biophys., 2013). El objetivo del presente trabajo fue determinar el efecto de NaDOC y UDCA, individual y conjunto, sobre la captación de Ca+2 en enterocitos con distinto grado de diferenciación y los posibles mecanismos involucrados. Además, se analizó el efecto de dichos AB sobre la expresión génica, proteica y actividad de moléculas de la vía extrínseca de la apoptosis y la participación del estrés nitrosativo. Se utilizaron ratas Wistar machos adultas (n=6 por grupo): 1) controles, 2) tratadas con NaDOC (10 mM), 3) tratadas con UDCA (60 µg/100g. peso corporal) y 4) tratadas con NaDOC+UDCA, por vía luminal durante 30 minutos. Los enterocitos con distinto grado de maduración se obtuvieron por estimulación mecánica y la captación de Ca+2 se realizó mediante el uso de Ca45. La expresión génica de FAS y FASL se cuantificó por PCR en tiempo real. La expresión proteica de FAS, FASL, procaspasa-8, caspasa-8 y óxido nítrico sintasa inducible (iNOS) se analizó por Western blot. La actividad de caspasa 3 y el contenido de óxido nítrico (NO) se midieron por espectrofotometría. Los resultados obtenidos se analizaron mediante ANOVA y el test de Bonferroni como prueba post hoc. Los resultados indican que la captación de Ca+2 fue menor en los enterocitos maduros tratados con NaDOC y mayor en los enterocitos maduros tratados con UDCA en comparación con los controles. Los enterocitos maduros tratados con ambos AB presentaron valores similares a los de los controles. Los diferentes tratamientos no produjeron diferencias en la captación de Ca+2 en enterocitos inmaduros. La expresión proteica de Fas, FasL y caspasa-8 aumentó con NaDOC, mientras que la procaspasa-8 disminuyó con dicho tratamiento y la expresión génica de FAS y FASL no fue afectada. El tratamiento con NaDOC aparentemente produce estrés nitrosativo ya que hay incremento en la expresión proteica de iNOS y en el contenido de NO. En conclusión, NaDOC disminuye la absorción del catión porque inhibe la captación de Ca+2 en enterocitos maduros debido, al menos en parte, a que estimula la vía extrínseca de la apoptosis y el estrés nitrosativo. Por el contrario, UDCA bloquea la apoptosis en enterocitos maduros y previene los efectos adversos del NaDOC impidiéndose así la inhibición de la absorción intestinal del catión.