“Método para la extracción de RNA basado en el uso de nanopartículas magnéticas”.

NATALIA CAPRIOTTI; SHEILA ONS; LUCILA TRAVERSO; ROMANOWSKI VÍCTOR; PIDRE MATIAS LUIS; FERRELLI MARÍA LETICIA; MARÍA FLORENCIA LOPEZ; AMORÓS MORALES LESLIE C.; PEDRO MENDOZA ZELIS; LUCIANA JUNCAL; DE SOUSA ELISA; SCHILARDI PATRICIA; LILLO CRISTIAN; CLAUDIA RODRÍGUEZ TORRES

Congreso; SAPROBIO 2021; 2021

El aislamiento y purificación de RNA de calidad es un paso fundamental para asegurar unaalta especificidad y sensibilidad en la detección, cuantificación y diagnóstico de enfermedadespor RT-qPCR. Los métodos de obtención de ácidos ribonucleicos deben ser robustos y de altorendimiento con alta capacidad de fabricación y distribución. En la actualidad, la mayoría delos kits comerciales utilizados son costosos, poseen a menudo múltiples componentes que noson fácilmente reemplazables y su suministro no se puede garantizar dado que sonimportados. Además, algunos de ellos requieren de equipamiento sofisticado, no siempredisponibles en los laboratorios de investigación y diagnóstico. Por ende, la metodologíadisponible no ofrece suficiente flexibilidad y disponibilidad cuando se trata de una granepidemia o una pandemia, como lo es la de COVID-19. El objetivo del trabajo esproporcionar un protocolo de extracción de RNA basado en perlas magnéticas de sílice debajo costo, independiente de equipamiento sofisticado y de producción nacional. Elprocedimiento de extracción por este método incluye etapas de inmovilización rápida yeficiente de las moléculas de RNA sobre la superficie de las nanopartículas y la posterioraplicación de campos magnéticos lo cual permite separar de forma rápida y eficiente losácidos nucleicos evitando pasos de centrifugación. El cambio en la concentración de sales enel medio permite una elución eficiente para los posteriores pasos de amplificación por elmétodo de elección. Se han realizado pruebas de extracción en distintas muestras biológicas:tejidos provenientes de insectos, línea celular de pulmón y muestras de hisopado oro- ynasofaríngeos de pacientes sospechados de tener coronavirus obteniéndose niveles derendimiento y calidad de RNA similares a los kits disponibles comercialmente y, ademáshemos obtenido niveles de Ct (-Cycle threshold-) igualables por RT-qPCR. En estapresentación se describirán los antecedentes de esta metodología, el estado actual del proyectoy las perspectivas de implementación en laboratorios de diagnóstico y de biología molecular.