Mapeo espacial de proteínas que componen las adhesiones focales mediante N&B

LORENA SIGAUT; CATALINA VON BILDERLING; LAURA C. ESTRADA; LÍA I. PIETRASANTA

Buenos Aires

Congreso; Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Biofísica; 2011

Sociedad Argentina de Biofísica

Las adhesiones focales (AFs) son grandes complejos multiproteicos que sirven como puntos de tracción para la célula, estableciendo una conexión entre la matriz extracelular y la actina del citoesqueleto. Conocer la organización espacial, la dinámica y las interacciones de las distintas proteínas que conforman las AFs representa un gran desafío. Los métodos para su estudio deben contar con una resolución espacio-temporal alta, de forma tal que permitan detectar eventos transientes y altamente localizados que ocurren en una determinada región de la célula. En particular nos interesa estudiar la distribución espacial, concentración y estequiometría de las proteínas paxilina, vinculina, zyxina y FAK que forman parte de las AFs1. Con ese fin utilizamos el método N&B2 (Number and Brigthness). Se trata de una de las técnicas derivadas de FCS3 (Fluorescente Correlation Spectroscopy) que se basa en la correlación de las fluctuaciones de la intensidad de la fluorescencia en un volumen confocal del orden del femto litro. N&B permite determinar el número de moléculas y el brillo molecular en cada píxel de una imagen de fluorescencia. De esta manera es posible detectar la presencia de complejos de proteínas y revelar su estequiometría. En este trabajo se estudia la distribución y estequiometría de los complejos para las proteínas de AF paxilina, vinculina, zyxina y FAK. Se presentan los resultados obtenidos a partir de experimentos de N&B en células de epitelio mamario de ratón, HC11, transfectadas con vectores de expresión para fusiones de EGFP y cada una de las proteínas mencionadas.