Optimización de medio de cultivo para la producción de fenilalanina amonio liasa empleando Rhodosporidium toruloides

CASTAÑEDA, MARÍA TERESITA; CAVALITTO, SEBASTIÁN; HOURS, ROQUE A.; MIGNONE, CARLOS F.

Encuentro; VIII Encuentro Latinoamericano y del Caribe de Biotecnología (REDBIO); 2013

La enzima Fenilalanina amonio liasa (PAL, EC 4.3.1.5) cataliza la biotransformación de Lfenilalanina (Phe) en ácido t-cinámico y amoníaco. Entre los usos potenciales de PAL se encuentra su empleo en el tratamiento de la fenilcetonuria, enfermedad autosómica recesiva caracterizada por la incapacidad de metabolizar la Phe. Si bien existen trabajos sobre optimización de medios complejos, hay escasos registros sobre la influencia de los microlementos incluidos en el medio sobre la actividad PAL. En este trabajo se optimizó laactividad específica de PAL, en función de los componentes cuantitativamente minoritarios de un medio de cultivo basal para crecimiento de levaduras, empleando Rhodosporidium toruloides IFO 0559. Para ello se utilizó un diseño multifactorial incompleto, mediante una matriz de Plackett-Burman. Se evaluaron 11 variables a 2 niveles en 16 experimentos (4 experimentos basales): pH, potasio (K), magnesio (Mg), calcio (Ca), cobre (Cu), hierro (Fe), zinc (Zn), manganeso (Mn), L-fenilalanina (Phe), L-isoleucina (Ile) y extracto de levadura(Britania). A partir de este diseño se demostró que los factores que afectansignificativamente (99% confianza) a la actividad PAL son: Cu, Zn, Phe y extracto de levadura. A excepción de la Phe, los efectos de dichos componentes resultaron negativos en función de PAL.