Efecto de la suplementación con manganeso al medio de cultivo sobre la integridad del ADN en células del cúmulus cultivadas in vitro

ANCHORDOQUY JP; ANCHORDOQUY JM; MATTIOLI G; ROSA DE; PICCO SJ; SEOANE A; FURNUS C

Comarca Viedma-Patagones

Congreso; 33° Congreso Argentino de Producción Animal; 2010

Asociación Argentina de Producción Animal

EFECTO DE LA SUPLEMENTACIÓN CON MANGANESO AL MEDIO DE CULTIVO SOBRE LA INTEGRIDAD DEL ADN EN CELULAS DEL CUMULUS CULTIVADAS IN VITRO. Anchordoquy, J.P.1, 2, Anchordoquy, J.M.1, 2, Mattioli, G.2, Rosa, D.E.2, Picco, S.J.1, 2, Seoane, A.¹, Furnus, C.1, 3.(1) Instituto de Genética Veterinaria (IGEVET), UNLP/CONICET, Calle 60 y 118 s/n (1900) a Plata; (2) Cátedra de Fisiología, Facultad de Ciencias Veterinarias, UNLP. (3) Cátedra de Citología, Histología y Embriología A, Facultad de Ciencias Médicas, UNLPEffect of manganese supplemented culture medium on in vitro cultured cumulus cells DNA integrityEl manganeso (Mn) es un elemento traza esencial. La deficiencia de Mn, usualmente provocada por una carencia nutricional, se caracteriza por la paulatina disminución en la actividad de diferentes enzimas Mn-dependientes. Dentro de estas enzimas se encuentra la Mn superóxido dismutasa, la cual posee un rol importante en el mantenimiento del estatus antioxidante celular. Las células del cúmulus, que rodean a los ovocitos durante la maduración, juegan un rol importante en la capacidad de desarrollo posterior de estos hasta el estadio de blastocisto. Esto se debe a que las células se hallan unidas metabólicamente a través de uniones GAP que conectan a las células del cúmulus entre sí y con el ovocito, interviniendo en el soporte metabólico del mismo. Estudios recientes han demostrado que el estrés oxidativo que sufren las células del cúmulus durante la maduración in vitro (MIV) puede provocar daño en su ADN. El objetivo del presente trabajo fue evaluar la integridad del ADN de las células foliculares que forman el complejo ovocito-cúmulus (COCs), expuestas a diferentes concentraciones de Mn durante la MIV de ovocitos bovinos. Para ello, se obtuvieron COCs de ovarios de vaquillonas faenadas. Los ovarios se colectaron en 3 días diferentes (bloques) y en cada día se recogieron 200 COCs. Los COCs se dividieron en 4 grupos, usando 50 COCs (unidad experimental) por tratamiento, y se maduraron en medios con diferentes concentraciones de Mn. Los tratamientos consistieron en el agregado de Mn al medio de cultivo de modo de alcanzar las concentraciones indicativas de carencia severa (CS), moderada (CM) o normalidad (N) en plasma (0,2; 0,4 y 0,6 µg/dl respectivamente), quedando un tratamiento control (C) sin suplementar. Los COCs se maduraron in vitro en medio TCM 199 suplementado con 5% de suero bovino fetal, FSH y LH, durante 24 hs a 39°C en atmósfera gaseada con 5% de CO2. El análisis de integridad del ADN se realizó a partir del ensayo cometa en su versión alcalina. El daño en el ADN se evaluó por Olive Tail Moment (OTM). Para este análisis se utilizaron 50 células de cada unidad experimental. Los promedios de OTM fueron analizados como un diseño de bloques completamente aleatorio con el procedimiento mixto SAS 9.1. El modelo que se utilizó consideraba bloque como un factor aleatorio y tratamientos como factor fijo. Para la comparación de las medias de los tratamientos se realizó un contraste polinomial lineal, cuadrático y cubico. Los resultados de este experimento demostraron solo una disminución lineal (P < 0,01) del OTM a medida que la concentración de Mn aumentaba, siendo las asociaciones cuadrática y cúbica no significativas (P = 0,20 y 0,30 respectivamente). Los valores de OMT fueron 4,82 (± 0,32), 3,38 (± 0,32), 3,47 (± 0,32) y 2,95 (± 0,32) para C, CS, CM y N respectivamente. Los presentes resultados sugieren que dentro de las concentraciones de Mn utilizadas en este experimento, la suplementación al medio con este mineral tiene un impacto beneficioso lineal sobre la integridad del ADN de las células del cúmulus maduradas in vitro.