Suplementación con cobre y zinc en la maduración in vitro de ovocitos bovinos

PICCO SJ; TESTA J; ANCHORDOQUY JP; ANCHORDOQUY JM; SEOANE A; ROSA DE; FURNUS CC; MATTIOLI GA

Mar del Plata

Congreso; 34° Congreso Argentino de Producción Animal ? 1st Joint Meeting ASAS; 2011

Asociación Argentina de Producción Animal y American Society of Animal Science

Suplementación con cobre y zinc en la maduración in vitro de ovocitos bovinos Picco SJ* 1,2; Testa J2; Anchordoquy JP1; Anchordoquy JM1; Seoane A1; Rosa DE2; Furnus CC1 y Mattioli GA2. 1. Instituto de Genética Veterinaria (IGEVET). Facultad de Ciencias Veterinarias. UNLP/CONICET. 60 y 118 s/n. 1900. La Plata. 2. Laboratorio de Nutrición Mineral y Fisiología Reproductiva. Cátedra de Fisiología. Facultad de Ciencias Veterinarias. UNLP. 60 y 118 s/n. 1900. La Plata. * spicco@fcv.unlp.edu.arCopper and zinc supplementation on in vitro maturation of bovine oocytesEl Zinc (Zn) y el Cobre (Cu) son micronutrientes esenciales que se hallan en pequeñas cantidades en una diversidad de tipos celulares y tejidos. En el ovario, el líquido folicular provee el ambiente en el cual ocurre la maduración del ovocito, lo cual afecta su potencial de fertilización y el posterior desarrollo embrionario. En la maduración in vitro (MIV) de ovocitos dicho ambiente es proporcionado por el medio de cultivo. Previamente a la realización del presente trabajo encontramos que la suplementación de los medios de MIV hasta obtener concentraciones de Cu o Zn similares a los observados en plasma de animales con estatus normal de ambos minerales, reducían tanto alteraciones en la integridad del ADN como la frecuencia de células apoptóticas en células de la granulosa. Dichas células actúan como soporte metabólico del ovocito y juegan un rol fundamental en la capacidad de estos para desarrollar al estado estadio de blastocistos (Lonergan and Fair, 2008). A fin de estudiar el efecto de la combinación de suplementaciones de Cu y Zn en el medio de cultivo de MIV, que poseía 30 y 5 μg/dl de Zn y Cu respectivamente, complejos ovocito-cúmulos fueron cultivados en medios suplementados con ambos elementos según se cita: Tratamiento 1: 70 y 20 μg/dl de Zn y Cu; Tratamiento 2: 110 y 50 μg/dl of Zn y Cu, y Tratamiento 3: 150 y 80 μg/dl de Zn y Cu. El medio de cultivo usado como control no se suplementó con ningún mineral. Tras 24 hs de cultivo se analizó en las células del cúmulus la integridad del ADN, empleando el ensayo cometa versión alcalina, y la expresión de fosfatidilserina como indicador de apoptosis temprana. Se utilizó un diseño de bloques completamente aleatorios usando un modelo mixto en el programa SAS® (9.0) donde los tratamientos fueron variables fijas y las placas de maduración y los días de incubación (bloque) fueron variables aleatorias. Los resultados obtenidos muestran que sólo el tratamiento 1 indujo una reducción significativa en los valores de daño en el ADN (P < 0,01), mientras que los restantes tratamientos incrementaron el nivel de daño (Olive Tail Moment: Control: 3,07 ± 0,60; Tratamiento 1: 0,74 ± 0,24; Tratamiento 2: 34,3 ± 11,3; Tratamiento 3: 51,61 ± 7,3. La frecuencia de células apoptóticas (Control: 0,189; Tratamiento 1: 0,09; Tratamiento 2: 0,17; Tratamiento 3: 0,19) experimentó una reducción significativa sólo en el tratamiento 1 (P=0,019). Estos resultados difieren de los previamente observados, en los cuales la inclusión separada de Cu o Zn Zn o Cu en valores de 150 y 80 μg/dl de Zn y Cu respectivamente, redujeron los niveles de daño en el ADN y la frecuencia de células apoptóticas. Probablemente la presencia simultánea de ambos minerales generó un disturbio en la capacidad celular de fijación de dichos minerales, haciendo que el cobre libre exprese su capacidad oxidante. En conclusión, si bien la adicción adición de Cu y Zn demostró ser una herramienta eficaz para mejorar la integridad del ADN y disminuir la frecuencia de células apoptóticas en el cúmulus, la suplementación conjunta de ambos elementos genera un efecto perjudicial que merece ser considerado y profundizado.