Concentraciones elevadas de Cobre producen daño en el ADN y apoptosis en las células del cúmulus del bovino

ANCHORDOQUY JM; NIKOLOFF N; ANCHORDOQUY JP; SIRINI MA; PASCUA AM; FURNUS CC

Ciudad Autónoma de Buenos Aires

Congreso; 3° Congreso Internacional de la SATE; 2016

Sociedad Argentina de Tecnologías Embrionarias

Concentraciones elevadas de Cobre producen daño en el ADN y apoptosis en las células del cúmulus del bovino. Anchordoquy JM1,2, Nikoloff N2, Anchordoquy JP1,2, Sirini MA1, Pascua M1, Furnus C1. 1 IGEVET, Instituto de Genética Veterinaria ?Ing. Fernando N Dulout? (UNLP-CONICET-CONICET LA PLATA), Facultad de Ciencias Veterinarias - UNLP, Calle 60 118, B1904AMA La Plata, Buenos Aires, Argentina, 2Cat. Fisiología, Fac Cs Veterinarias, UNLP.El cobre (Cu) juega un rol fundamental en las células de mamífero como cofactor de metaloenzimas involucradas en la protección antioxidante, metabolismo del hierro, y múltiples procesos metabólicos. Sin embargo, la misma propiedad redox que lo vuelve un elemento esencial contribuye a su toxicidad. Durante la maduración, el ovocito se encuentra rodeado por las células del cúmulus (CC). Las CC participan en la maduración del ovocito y en su capacidad de desarrollo embrionario posterior. El objetivo de este trabajo fue estudiar el efecto de concentraciones elevadas de Cu sobre la tasa de apoptosis y daño en el ADN de CC cultivadas in vitro. Los complejos ovocito-cúmulus fueron aspirados de ovarios bovinos de frigorífico y madurados en medio TCM-199 con 10% SFB a 39°C en 5% de CO2 y humedad a saturación por 24 hs. El medio fue suplementado con concentraciones crecientes de Cu (0; 120; 240 y 360 µg/dl Cu) todas ellas superiores a la concentración fisiológica adecuada (60 µg/dl Cu). El porcentaje de CC con daño en el ADN y la tasa de apoptosis fueron evaluadas mediante el Ensayo Cometa y Anexina-V-Fluos, respectivamente. La técnica de anexina permite diferenciar células vivas (sin colorear), células apoptóticas (color verde) y células necróticas (color verde y naranja). Los datos fueron analizados con una regresión logística utilizando el procedimiento GENMOD (SAS Institute, Cary, NC). Los resultados se muestran en la Tabla 1. Tabla1. Daño en el ADN y tasa de apoptosis de CC cultivadas in vitro con altas concentraciones de CobreTratamiento CC con daño en el ADN CC apoptóticas CC necróticas CC vivas (%) (%) (%) (%)Control 10a 8,6a 15.6a75.6a120 µg/dl Cu 17b 15.3b 15.6a69.0b240 µg/dl Cu 20b 15.2b 27.8b56.9c360 µg/dl Cu 19b 13.5b 34.8c51.6d Los datos son expresados como porcentajes (%).a-c valores en la misma columna son diferentes (P ˂0,05).En conclusión, altas concentraciones de Cu elevan el daño en el ADN y la tasa de apoptosis en CC cultivadas in vitro.