EVALUACIÓN DEL DAÑO GENÓMICO EN CÉLULAS DEL CÚMULUS INDUCIDO POR LA HORMONA GHRELINA

SIRINI MA; NIKOLOFF N; ANCHORDOQUY JP; ANCHORDOQUY JM; PASCUA AM; TESTA JA; FURNUS C

La Plata

Congreso; II Congreso Internacional Facultad de Cs Médicas UNLP; 2015

Fac. Cs. Médicas de la U.N.L.P.

EVALUACIÓN DEL DAÑO GENÓMICO EN CÉLULAS DEL CÚMULUSINDUCIDO POR LA HORMONA GHRELINASirini MA1; Nikoloff N1; Anchordoquy JP1; Anchordoquy JM1; Pascua AM1; Testa JA1; Furnus CC1, 2.Instituto de Genética Veterinaria (IGEVET), UNLP/CONICET, Calle 60 y 118 s/n (1900) ; (2) Cátedrade Citología, Histología y Embriología A, Facultad de Ciencias Médicas, UNLP.e-mail: masirini@igevet.gob.arLas células del cúmulus (CC), que rodean a los ovocitos durante la maduración, jueganun rol importante en su capacidad de desarrollo posterior hasta el estadio de blastocisto.Esto se debe a que las células se hallan unidas a través de uniones gap que conectan a lascélulas del cúmulus entre sí y con el ovocito, interviniendo en el soporte metabólico delmismo.Si bien se ha demostrado, tanto en estudios in vivo como in vitro, que las célulasde la granulosa mueren a través del proceso activo deapoptosis, la información sobre estefenómeno en CC durante la maduración in vitro(MIV)es todavía muy limitada.El daño enel ADN puede ser el producto final del fenómeno de apoptosis o uno de los responsablesde su desarrollo. La ghrelina es un péptido gastrointestinal sintetizado principalmente enlas células oxínticas del estómago y el abomaso en los bovinos. Se descubrió que tambiénpuede ser sintetizada en otros tejidos, incluido los órganos reproductivos, ejerciendotanto efectos endócrinos como parácrinos. Estudios en diferentes especies reportan quealtas concentraciones de ghrelina podrían afectar negativamente la maduración de losovocitos, afectando así el desarrollo preimplantacional de los embriones.El objetivo delpresente trabajo fue evaluar el daño del ADN de las CCexpuestas a diferentes concentracionesde ghrelina durante la MIV de ovocitos bovinos. Los complejos ovocito-cúmlus(COCs) se obtuvieron de ovarios de vaquillonas faenadas en días diferentes (n=3 repeticiones)y en cada día se recogieron 200 COCs. Los 200 COCs se dividieron en 4 gruposde 50 COCs por tratamiento. El medio de maduración fue TCM 199 suplementado con10% de suero fetal bovino, FSH y LH. Los tratamientos consistieron en el agregado deghrelina al medio de maduración en concentraciones crecientes (20pM; 40pM y 60pM),quedando un tratamiento control (C) sin suplementar (0pM). Al finalizar la MIV, los ovocitosde cada tratamiento fueron separados de las CC por pipeteo. El daño en el ADN delas CC se determinó mediante la variante alcalinadel ensayo cometa. Los cometas fueronanalizados visualmente mediante un microscopio de fluorescencia y clasificados en 5grados de daño:grado 0 (cola no visible), grado 1 (cometas con cola delgada), grado 2(cometas con cola difusa), grado 3 (cometas con colas bien definidas), y grado 4 (cometascon una clara disminución en el diámetro de la cabeza y con una cola bien definida). Seutilizó un diseño en bloques completamente aleatorio, y se realizó una regresión logísticacon el procedimiento GENMOD de SAS 9.1. El modelo incluyó los efectos del frigoríficoy del tratamiento.El agregado de 20pM y 60pM de ghrelina durante la MIV aumentóel porcentaje de CC que presentaron daño en su ADN (29% y 35%, respectivamente)con respecto al control(11,67 %, p0,05).En conclusión, la suplementación con 20pM y 60pM de ghrelinaal medio de MIV, incrementa el número de CC que presentan daño en su ADN.PALABRAS CLAVES: Células del cúmlus; Ghrelina; Ensayo cometa.