Acido alfa lipoico (AAL) mejora la criotolerancia a la vitrificación de embriones producidos in vitro

FABRA M; ANCHORDOQUY J PATRICIO; CAMPAGNA A; CARRANZA, ANA C.; FARNETANO NA; ANCHORDOQUY J MATEO; FURNUS C; NIKOLOFF N

La Plata

Jornada; Jornadas de Investigacion 2022; 2022

Facultad de Cs Médicas, UNLP

TITULO Acido alfa lipoico (AAL) mejora la criotolerancia a la vitrificación de embriones producidos in vitroAutores: Fabra, Mariana C.* (1); Anchordoquy Juan P. (1); Campagna, Anabella A. (1); Carranza, Ana C. (1); Farnetano Nicolás A. (1); Anchordoquy Juan M. (1); Furnus Cecilia C. (1); Nikoloff, Noelia. (1)Lugar de Trabajo: (1) Instituto de Genética Veterinaria “Ing. Fernando N Dulout”, IGEVET (UNLP-CONICET-CONICET LA PLATA), Facultad de Ciencias Veterinarias - UNLP, Calle 60 118, B1904AMA La Plata, Buenos Aires, Argentinae-mail de contacto (IMPORTANTE): * maricfabra@gmail.comIntroducción: Los avances en la producción in vitro (PIV) y transferencia en reproducción asistida humana y en animales de interés ganadero exige que se optimicen los procedimientos de crioconservación embrionaria. La crioconservación requiere la exposición de las células a altos niveles de crioprotectores y osmolalidades aumentadas y a cambios extremos de temperatura, lo cual tiene efectos dramáticos en la fisiología. Se ha demostrado que los embriones producidos in vitro son menos resistentes a la vitrificación, la cual produce estrés osmótico, reduce el contenido de glutatión y aumenta los niveles de especies reactivas de oxígeno (EROs) debido al intento de reparar el daño crioinducido. Cuanto mayor sea la calidad del embrión, mejor resistirá estos efectos adversos. Los antioxidantes son efectivos para reducir el estrés oxidativo. Las propiedades antioxidantes de AAL se han descrito en diferentes especies, en las distintas etapas sucesivas de PIV (maduración in vitro, fertilización in vitro (FIV) y cultivo in vitro (CIV)).Objetivos: evaluar el efecto antioxidante de AAL durante las primeras 24 h de CIV sobre la calidad del embrión bovino, la competencia de desarrollo y la criotolerancia después de la vitrificación.Materiales y métodos: Se utilizaron ovocitos de ovarios de frigorífico sometidos a las etapas de PIV en una atmósfera gaseada (5% CO2; 39 °C; 7% O2). Los tratamientos utilizados fueron AAL 0 µM (Control) y AAL 2.5 µM en medio CIV durante las primeras 24 h. La concentración elegida se basó en nuestros estudios previos. Se registraron las tasas de clivaje en el día 2 (48 h después de la FIV), como embriones con 2-4 células (2-4c) o embriones con más de 4 células (> 4 c), blastocistos en los días 7 (B7), 8 (B8), y blastocistos totales (BT). Los blastocistos se vitrificaron después de la PIV. Luego del proceso de calentamiento, se evaluó la reexpansión a las 3 h y la tasa de eclosión a las 24, 48 y 72 h. También se evaluó la producción de EROs en embriones calentados. Los grados de calidad de B7 y B8 se verificaron según la clasificación de la Sociedad Internacional de Transferencia de Embriones (IETS) vitrificándose solo blastocistos grado 1, utilizando el dispositivo de superficie Cryotech®. Se usaron blastocistos calentados para evaluar la reexpansión a las 3 h y luego se dividieron aleatoriamente en dos grupos: uno se usó para evaluar la eclosión a las 24, 48 y 72 h, y el otro para evaluar los niveles intracelulares de EROs. Los datos se analizaron utilizando el software RStudio. Utilizamos un enfoque estadístico bayesiano. Los datos de clivaje, B7, B8, BT y vitrificación se analizaron con distribución Beta para la comparación de dos proporciones. Los niveles de EROs se analizaron mediante la comparación bayesiana de dos medias adaptados al enfoque frecuentista de distribución normal. Los valores de p < 0,05 se consideraron significativos y los valores de p < 0,1 como tendencia.Resultados: De un total de 1113 ovocitos se obtuvieron 313 embriones, los cuales no difirieron significativamente en las tasas de clivaje total entre tratamientos (P = 0,14). Las tasas de 2-4c no difirieron entre el Control y el AAL (P = 0,37); se observó una tendencia creciente en la tasa de > 4 (P = 0,10). Los resultados demostraron que la tasa de BT aumentó con el tratamiento con AAL (P = 0,01) debido a un aumento en la tasa de B7 (P = 0,002), mientras que la tasa de B8 no difirió (P = 0,22). Se clasificaron un total de 195 embriones según IETS, vitrificándose un total de 133 embriones en los días 7 y 8 de CIV. Observamos un aumento en el total de embriones vitrificados en AAL en comparación con el Control (P = 0,01) al día 7. Los porcentajes de reexpansión embrionaria, eclosión y niveles de EROs intracelulares después del proceso de vitrificación-calentamiento del día 7 y 8 blastocistos muestran que las tasas de reexpansión 3 h después del calentamiento no difirieron en los días 7 y 8 (P = 0,35 y P = 0,48, respectivamente). No se observaron diferencias en la tasa de eclosión entre AAL y Control a las 24 h. Sin embargo, los grupos fueron diferentes en la tasa de eclosión a las 48 h del día 7 y 8 (P = 0,05; P = 0,03, respectivamente) y en la tasa de eclosión a las 72 h del día 8 (P = 0,05). En cuanto a los niveles intracelulares de EROs, se redujeron en el grupo AAL el día 7 (P = 0,05).Conclusiones: La suplementación con AAL al medio de CIV durante 24 h mejoró la tasa y la calidad de los blastocistos y podría actuar como protección embrionaria en las técnicas de vitrificación.