Seroneutralización de la adherencia en líneas celulares Hep-2 frente a adhesinas bacterianas de Escherichia coli productor de toxina Shiga

COLELLO, R.; VELEZ, M.V.; NIETOS FARIAS, V.; ETCHEVERRÍA, A.I.; PADOLA, N.L.

Buenos Aires

Jornada; Jornadas de Microbiología Celular y Molecular (MicroMol).; 2021

Asociación Argentina de Microbiología

Escherichia coli productor de toxina Shiga (STEC) es un patógeno emergente, causante de síndrome urémico hemolítico (SUH). El bovino es el principal reservorio de STEC, donde esta bacteria puede transmitirse al hombre a través de la ingestión de alimentos, agua contaminada, contacto directo con el bovino o el ambiente. Las cepas STEC constituyen un grupo heterogéneo en relación a los mecanismos que utilizan para colonizar el intestino y la respuesta inmune que desencadenan en el reservorio bovino. Entre los múltiples mecanismos de adherencia se destaca la intimina codificada en el Locus LEE, una nueva isla de patogenicidad denominada Locus de adherencia y autoagregación (LAA) que codifica genes como hes, ihalaa, agn43, cah, un plásmido pO113 que contiene distintos genes como ihapla, un megaplásmido que codifica el gen saa que es una adhesina autoaglutinante. El objetivo del estudio fue estudiar la neutralización de sueros bovinos a la adherencia de STEC a líneas celulares Hep-2.Se estudiaron 5 cepas STEC: 2 STEC LEE positivas (O26 y O157), 2 STEC LEE negativas (O91 y O130) una cepa O91 mutante, carente de LAA (O91∆LAA). Cada cepa fue incubada over night en 10 ml de caldo Luria Bertani. Se realizaron triplicados de diluciones de hasta 104 de cada cepa. La dilución 1 se denominó control, a la dilución 2 se le agregó 100 μl de suero de vaca en ordeño (condición VO) y a la dilución 3 se le agregó suero de terneros de guachera (condición TG). Las células se cultivaron en medio MEM con 10 % de suero fetal bovino a 37ºC con una atmósfera de 5 % de CO2. Se sembraron en cada pocillo por duplicado con MEM, 100 μl de la cepa del control, de la condición VO y de la condición TG, incubándose 3 h a 37ºC. Se descartó el sobrenadante, se lavó la monocapa 2 veces con 400 μl de PBS estéril a temperatura ambiente y 100 μl de Tripsina-EDTA y se incubó 10 minutos a 37ºC. Finalmente, se lavó 2 veces con 400 μl de PBS y se recuperó el volumen del lavado que se diluyó 10-1; 10-2 y 10-3 para la siembra en placas MacConkey, por duplicado. Se incubaron a 37°C durante 24h y se realizó el conteo de UFC. Para cada condición se relacionó la cantidad de bacterias adheridas con las sembradas, y se promediaron los resultados de los duplicados. Todas las cepas utilizadas fueron neutralizadas por los sueros bovinos y disminuyeron su adherencia a la línea celular Hep-2, con diferencias entre sueros VO y TG. No hubo diferencias entre la cepa O157 control y la neutralizada, tanto con sueros de vaca como con los de terneros, aunque se detectaron diferencias entre los mismos. La expresión de adhesinas de STEC es un evento coordinado, y en muchas ocasiones con expresión diferencial entre adhesinas, dependiente de la cepa y su entorno. La seroneutralización de distintos serotipos STEC demuestra que el bovino tiene anticuerpos dirigidos contra distintas adhesinas que impiden la adherencia a la línea celular Hep-2.