Evaluación de la Expresión y Actividad de Metaloproteasas de la Matriz en la Glándula Mamaria Bovina y su Relación con la Persistencia de las Infecciones por Staphylococcus aureus durante la Involución

BECCARIA C; RENNA M.S; CHERVAZ V; ANDREOTTI CS; BARAVALLE C; SILVESTRINI, P; PEREYRA EAL; VELAZQUEZ N; PIROLA S; CALVINHO L.F; DALLARD BE

Jornada; V Reunión Anual RELIM (Red Latinoamericana de Investigación en Mastitis); 2019

Introducción Staphylococcus aureus es el patógeno más frecuentemente aislado de casos de mastitis en Argentina y el mundo y causa infecciones intramamarias (IIM) con tendencia a la cronicidad que generan un extenso daño al tejido mamario. La glándula mamaria (GM) bovina es altamente susceptible a las nuevas IIM durante la etapa temprana del periodo de involución; etapa que se caracteriza por una intensa remodelación tisular que implica la muerte coordinada de células epiteliales y estromales mamarias, degradación de la matriz extracelular (MEC) y regeneración del tejido adiposo. Las metaloproteasas de la matriz (MMPs) son una familia de enzimas que escinden selectivamente sustratos como los de la MEC y péptidos de quimioquinas, actuando durante la remodelación normal de los tejidos y durante el daño tisular asociado a la inflamación. Las MMPs más estudiadas son MMP-2 (gelatinasa A) y MMP-9 (gelatinasa B) y su actividad está regulada por inhibidores tisulares de metaloproteasas (TIMPs). El objetivo de este trabajo fue evaluar la expresión proteica de MMP-2 y MMP-9 y sus inhibidores (TIMP-1 y TIMP-2) en tejido mamario y establecer diferencias en cuartos sanos e infectados con S. aureus durante la involución activa. Por otra parte, se evaluó la actividad gelatinolítica de MMP-2 y MMP-9 en secreción mamaria. La principal fuente de MMPs en la GM son los neutrófilos y macrófagos, por lo tanto en este trabajo se evaluó el porcentaje de células mononucleares (CMN) CD14+ presentes en sangre y secreción de animales sanos e infectados crónicos por S. aureus.Materiales y MétodosSe utilizaron vacas Holando Argentino no preñadas en la etapa final de la lactancia. Se tomaron como unidades experimentales los cuartos mamarios. Se utilizaron cuartos libres de IIM (n=15) y cuartos con IIM crónicas por S. aureus (n=15). Se definió como IIM crónica al aislamiento del mismo organismo a partir de tres muestras consecutivas a intervalos de 21 ds. Se obtuvieron muestras de tejido mamario a los 7, 14 y 21 ds luego del último ordeño. Muestras provenientes de cuartos sanos (n=5) e infectados crónicos por S. aureus (n=5) fueron incluidas en cada grupo (7, 14 y 21 ds). La identificación en tejido mamario de las enzimas MMP-2 y MMP-9 y de sus inhibidores (TIMP-1 y TIMP-2) se realizó por inmunohistoquímica utilizando anticuerpos específicos. Por otro lado se determinó la actividad enzimática de MMP-2 y MMP-9 en secreciones mamarias provenientes de cuartos sanos e infectados mediante zimografía en geles de poliacrilamida con el agregado de gelatina. Las muestras de secreción se obtuvieron inmediatamente antes del secado (hora 0), a las 12 hs y al día 1, 2, 3, 4, 5, 7, 14 y 21 post secado. También se evaluó el porcentaje de CMN presentes en sangre y secreción mamaria de animales sanos e infectados crónicos por S. aureus mediante inmunomarcación con el anticuerpo anti CD14-APC y adquisición por citometría de flujo (Attune, NxT Acoustic Focusing Cytometer A24860). Resultados La inmunomarcación para MMP-2, MMP-9, TIMP-1 y TIMP-2 se asoció al citoplasma de células epiteliales alveolares y conductos excretores del parénquima mamario, tanto en cuartos sanos como en cuartos infectados. Asimismo, en el estroma interalveolar y en el interior de conductos y alvéolos se observaron macrófagos y neutrófilos con su citoplasma inmunoreactivo para las diferentes proteínas evaluadas. La expresión de MMP-2 se vio influenciada por el proceso infeccioso (p