Evaluación de la activación del factor de transcripción nuclear (NF-кB) en glándula mamaria murina infectada experimentalmente con dos cepas de S. aureus de origen bovino

PEREYRA EAL; SILVESTRINI, P.; SACCO S; BECCARIA C; BARAVALLE C; RENNA MS; CALVINHO L.F; DALLARD BE

Congreso; X Reunión Argentina de Patología Veterinaria y X Seminario de la Fundación Charles Davis Foundation en Argentina; 2016

El factor de transcripción nuclear-kappa B (NF-кB)juega un rol clave en la respuesta inmune frente ainfecciones bacterianas. Es un complejo de proteínashomo o heterodiméricas donde el complejo p65-p50 esel más abundante. La activación de NF-кB, involucra lafosforilación y rápida degradación de la proteína inhibitoria(IκB) la cual lo mantiene secuestrado en el citoplasma.Luego de su activación el complejo proteico se translocaal núcleo, ejerciendo así la acción transcripcional deciertos genes que involucran la síntesis y secreción decitoquinas proinflamatorias1. Se propone como objetivoidentificar y cuantificar células con NF-κB activo luego de lainoculación experimental en glándula mamaria (GM) murinade dos cepas de Staphylococcus aureus de origen bovinocon características genéticas, clínicas y epidemiológicasdiferenciales mediante inmunohistoquímica (IHQ). Paralas inoculaciones experimentales se utilizaron dos cepasde S. aureus de origen bovino seleccionadas segúncriterios clínicos y epidemiológicos, utilizando técnicasbacteriológicas tradicionales y técnicas de biologíamolecular que permitieron diferenciarlas genéticamente. Lacepa A, aislada solo una vez durante la lactancia a partir deun animal con infección intramamaria (IIM) clínica (cepa nopersistente) y la cepa B de un animal con IIM crónica aisladadurante toda la lactancia (cepa persistente). Se utilizaron 3grupos de ratones en lactancia que fueron inoculados enforma intramamaria con las cepas A, B y solución fisiológica(control). Los ratones fueron sacrificados a diferentestiempos post inoculación (pi): 6, 12, 24, 48, 72, 96, 120,168, 216 y 264 h. Se extrajeron muestras de tejido mamariopara la realización de IHQ utilizando un anticuerpo primarioespecífico (anti-NF-κBp65, Santa Cruz Biotechnology). ElNF-κB activado fue detectado por la localización nuclearde p65 en células epiteliales (EP) y estromales (ES) de laGM y se cuantificó utilizando el programa Image-Pro Plus3.0.1. Se consideraron como células positivas aquellas quemostraron tinción nuclear intensa y el resultado se expresócomo porcentaje de células intensamente marcadas. Losporcentajes de células EP y ES inmunomarcadas se vieron influenciados por los tratamientos aplicados (P