Evaluación del efecto inmunoprotector de Panax ginseng en glándula mamaria murina infectada con S. aureus

SILVESTRINI, P; BECCARIA C; RENNA MS,; PEREYRA EAL; ORTEGA HH; CALVINHO L.F; DALLARD BE; BARAVALLE C

Esperanza

Congreso; X Reunión Argentina de Patología Veterinaria y X Seminario de la Fundación Charles Davis Foundation en Argentina; 2016

El uso de compuestos modificadores de las respuestasinmunes frente a infecciones intramamarias (IIM) en bovinos,constituye una alternativa a los tratamientos tradicionalescon antibióticos. El ginseng es la raíz del Panax ginseng(PG) C.A. Meyer (Araliaceae), y ha sido ampliamenteutilizado para el tratamiento y prevención de numerosasenfermedades en animales y humanos. Si bien estudiosprevios1 realizados por nuestro grupo de investigaciónhan demostrado la capacidad inmunoestimulante del PGaplicado al momento del secado en glándulas mamarias(GM) bovinas no infectadas, el efecto inmunoprotectorfrente a una IIM no sido estudiado. El objetivo del presentetrabajo fue evaluar el efecto inmunoprotector del PG frentea una infección experimental por Staphylococcus aureus(S. aureus) en GM murina mediante el análisis del perfilde infección bacteriana y la cuantificación del número demonocitos-macrófagos por IHQ. Para ello, se utilizarondos grupos de ratones cepa BALB/cJ en lactancia quefueron inoculados en forma intramamaria (IM) con 100μl de extracto de PG (50mg/ml) (Grupo I) y con 100 μlde solución fisiológica (SF) (Grupo II). A las 72 h postinoculación(PI), ambos grupos fueron infectados con unadosis de 1x105 UFC/glándula de S. aureus. Paralelamente,un tercer grupo de ratones fue inoculado solamente con lamisma dosis bacteriana (Grupo III). A las 6, 24, 48, 72 y 96 hpost-infección (pi) se extrajeron las GM y se las dividió en 3porciones para realizar diferentes técnicas. Para determinarel perfil de infección generado y el clearance de la bacteriaen la GM se cuantificó el número de unidades formadorasde colonias (UFC) recuperadas/glándula a distintos tiempospi por el método de dilución y siembra en placa de agarbase.Otras porciones de tejido se procesaron mediantetécnicas histológicas de rutina para la realización de IHQempleando un anticuerpo específico para monocitosmacrófagos(anti-CD14). Las células CD14 positivas fueronidentificadas debido a una marcación citoplasmática de colormarrón dada por el cromógeno utilizado (diaminobencidina).Para la cuantificación de monocitos-macrófagos sedigitalizaron campos microscópicos que cubrieron toda elárea a analizar en un aumento de 40x, tomándose entre30 y 40 imágenes por corte histológico y obteniéndose elnúmero de células positivas por unidad de área (mm2).La especificidad del anticuerpo primario utilizado en IHQse corroboró mediante western blot en muestras de tejidomamario murino homogenizado. La evaluación estadísticade los datos obtenidos se realizó por ANOVA factorial. Esteanálisis evalúa los efectos individuales del tratamiento (T)y del tiempo de muestreo (t) así como de la interacciónentre ambos factores (Txt), utilizando el programa SPSS.En cuanto a la evaluación del perfil de infección, el númerode UFC recuperadas de la GM fue menor en los ratonestratados con PG e infectados con S. aureus (Grupo I) encomparación con el número de UFC recuperadas de las GMde los Grupos II y III (p