Cambios histomorfométricos y variación en la expresión de colágeno I en glándula mamaria bovina infectada por Staphylococcus aureus durante la involución activa?.

ANDREOTTI CS; PEREYRA EAL; BARAVALLE C; RENNA MS; SACCO S; ORTEGA HH; CALVINHO LF; DALLARD BE

Jornada; XIV Jornadas de Divulgación Técnico-Científicas 2013 de la Facultad de Ciencias Veterinarias; 2013

El periodo no lactante en vacas lecheras, comúnmente referido como periodo de secado, es un determinante importante para la producción de leche en la lactancia siguiente. Durante el periodo no lactante la glándula mamaria bovina se somete a una intensa remodelación que involucra dos fases principales, una de involución activa y otra de mamogénesis. Estas  fases se caracterizan por la renovación y reemplazo de las células epiteliales secretoras así como también por los cambios en la composición del estroma intralobulillar3. Durante la involución temprana de la glándula mamaria bovina el riesgo de infecciones intramamarias (IIM) se ve incrementado, y ha sido relacionado con cambios durante este periodo que facilitan la penetración bacteriana por el canal del pezón, interferencia con los mecanismos de defensa naturales y aumento del crecimiento bacteriano. Además, las IIM presentes al momento del secado pueden persistir a lo largo de este periodo a pesar del uso de antibióticos, llevando a un incremento en las pérdidas de producción de leche en la lactancia siguiente2. Staphylococcus aureus es un patógeno mayor de la ubre que causa principalmente mastitis subclínicas y crónicas que responden pobremente a la terapia con antibióticos4. Cuando la IIM persiste, los ductos mamarios se obstruyen y la leche acumulada ocasiona que las células secretorias adquieran un estado de resistencia (no productor) lo que lleva a una reducción del tamaño de los alvéolos. La actividad de los fibroblastos es estimulada con el consecuente aumento del tejido conectivo del estroma. El daño al epitelio alveolar deviene en una disminución de la capacidad secretora de leche y las áreas dañadas de los cuartos afectados se vuelven no funcionales debido a la fibrosis1. El objetivo del trabajo fue evaluar cambios histomorfométricos en el parénquima y estroma mamario e investigar variaciones en la expresión de colágeno I en glándula mamaria bovina sana e infectada con S. aureus durante la involución activa. Se utilizaron vacas Holstein no preñadas, en la etapa final de la lactancia. Se obtuvieron muestras de tejido mamario a los 7, 14 y 21 días luego del último ordeño. Cuartos sanos (n=8) e infectados crónicos por S. aureus (n=8) fueron incluidos en cada grupo (7, 14 y 21 días). Los tejidos fueron procesados para la realización de técnicas de inmunohistoquímica y análisis morfométricos. Se utilizó el anticuerpo primario anti-bovine-collagen I (Serotec) y el sistema de revelado estreptavidina-peroxidasa-DAB. La especificidad del anticuerpo primario utilizado se evaluó mediante western blot. Para la cuantificación del área inmunomarcada y obtención de los porcentajes de parénquima y estroma mamario se empleó el programa Image-Pro Plus 3.0.1 (Media Cybernetic). Para el análisis estadístico de los datos se utilizó ANOVA factorial que evalúa los efectos del estado infeccioso, el tiempo y la interacción. En caso de interacción significativa (p<0.01) se realizó una t-student para cada punto del tiempo. La inmunomarcación fue positiva en fibras de colágeno tipo I de la matriz extracelular. El área inmunomarcada fue mayor en cuartos infectados respecto a los sanos en todos los periodos evaluados (p<0,001), fue afectada también por el tiempo de muestreo (p<0,001), existiendo además una interacción significativa entre el estado infeccioso y el tiempo de muestreo (p<0,001). La mayor expresión de colágeno I en cuartos infectados se detectó al  día 21 de la involución. Conjuntamente, en cuartos infectados, se observó marcación intensa alrededor de alvéolos y conductos en un área adyacente a la membrana basal, la cual fue especialmente evidente al día 21. En cuanto al análisis morfométrico, tanto los porcentajes de parénquima como de estroma intralobulillar, fueron mayores en cuartos infectados respecto a los sanos (p<0,001), existiendo además un efecto del tiempo (p<0,001), así como una interacción significativa entre el tiempo y el estado infeccioso (p<0,001). Los porcentajes de estroma interlobulillar fueron menores en cuartos infectados con respecto a los sanos (p<0,001), observándose en cuartos infectados porcentajes similares a lo largo del periodo de muestreo. De los resultados presentados se concluye que el incremento observado en componentes del estroma mamario en cuartos infectados en forma crónica por S. aureus podría inducir una involución aberrante de la glándula con incremento en el área estromal intralobulillar y persistencia del tejido parenquimatoso no secretor. Esta alteración en el proceso de remodelación de la glándula mamaria causada por la infección podría conducir a una disfunción de la misma y a una deficiente producción de leche. BIBLIOGRAFÍA 1. Akers, R.M.; Nickerson, S.C. Mastitis and its impact on structure and function in the ruminant mammary gland. J. Mammary Gland Biol. Neoplasia. 16, 275-289, 2011. 2. Eberhart, R.J. Management of dry cow to reduce mastitis. J. Dairy Sci.69, 1721-1729, 1986. 3. Sorensen, M.T.; Norgaard, J.V.; Theil, P.K.; Vestergaard, M.; Sejrsen, K. Cell turnover and activity in mammary tissue during lactation and the dry period in dairy cows. J. Dairy Sci. 89, 4632-4639, 2006. 4. Zecconi, A.; Calvinho, L.; Fox, L. Staphylococcus aureus intramammary infections. Bull. Int. Dairy Fed. 408, 1?36, 2006.