Balance proliferación/apoptosis en glandula mamaria bovina infectada por Staphylococcus aureus durante la involucion?.

ANDREOTTI CS; PEREYRA EAL; SACCO S; BARAVALLE C; RENNA M.S; ORTEGA HH; CALVINHO L.F; DALLARD BE

Jornada; IX Reunión Argentina de Patología Veterinaria (RAPAVE); 2014

Durante el periodo de involución, en la glándula mamaria (GM) bovina, se produce un importante proceso de remodelación que implica regresión (apoptosis), proliferación y diferenciación de las células mamarias a los fines de prepararse para la lactancia siguiente. Durante la involución temprana aumenta el riesgo de infecciones intramamarias (IIM) relacionadas con cambios morfológicos que facilitan la penetración bacteriana por el canal del pezón, al interferir con los mecanismos de defensa naturales y favorecer el crecimiento bacteriano. La mastitis bovina, es reconocida mundialmente como la enfermedad más costosa del ganado lechero, ocasionando graves daños al tejido mamario. Dicho daño puede estar inducido por dos mecanismos principales de muerte celular: necrosis o apoptosis, diferenciadas por los cambios morfológicos, bioquímicos y moleculares que se producen en las células destinadas a morir. Staphylococcus aureus es un patógeno mayor de la GM que causa principalmente mastitis subclínicas y crónicas que responden pobremente a la terapia antibiótica. El objetivo del trabajo fue evaluar cambios en el balance proliferación/apoptosis durante la involución de la GM bovina, en cuartos sanos en relación a infectados crónicos por S. aureus, cuantificando la expresión de PCNA (antígeno nuclear de proliferación celular) por inmunohistoquímica (IHQ), e identificando apoptosis in situ por TUNEL (terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labelling). Se utilizaron vacas Holstein no preñadas, en la etapa final de la lactancia. Se obtuvieron muestras de tejido mamario a los 7, 14 y 21 días luego del último ordeño. Cuartos sanos (n=8) e infectados crónicos por S. aureus (n=8) fueron incluidos en cada grupo (7, 14 y 21 días). Los tejidos fueron incluidos en parafina. Para evaluar la proliferación se realizó IHQ utilizando el anticuerpo primario anti-PCNA clon SC56 y el sistema de revelado estreptavidina-peroxidasa-DAB. Para evaluar apoptosis se realizó la técnica TUNEL utilizando el kit Apop Tag® Plus?Peroxidasa (Chemicon) que permitió la marcación enzimática de la ruptura de las cadenas de ADN y la detección de apoptosis in situ. Para la cuantificación y obtención de los porcentajes de proliferación y apoptosis se empleó el programa Image-Pro Plus 3.0.1 (Media Cybernetic). Para el análisis estadístico de los datos se utilizó ANOVA factorial que evalúa los efectos de la IIM, del tiempo y la interacción. En caso de un efecto significativo del tiempo (p<0.05) se realizó t-student para cada tiempo de muestreo. En el parénquima mamario el análisis de los porcentajes de proliferación, evaluados a través de la expresión nuclear de PCNA, reveló un efecto significativo de la IIM y del tiempo de muestreo (p<0,001), mientras que la interacción entre ambos factores no fue significativa (p=0,725); a su vez en los cuartos infectados los porcentajes de proliferación fueron mayores respecto de los sanos en todos los períodos evaluados (p<0,05). En el estroma mamario, se observó un efecto significativo del tiempo de muestreo (p<0,001), mientras que el efecto de la IIM no fue significativo (p=0,50) ni existió interacción (p=0,057); tampoco se observaron diferencias en los porcentajes de proliferación en entre cuartos infectados y sanos en ninguno de los tiempos evaluados (p>0,05). En relación a la apoptosis, en el parénquima mamario, el análisis de los porcentajes de células reactivas a la técnica de TUNEL reveló un efecto de la IIM (p=0,023) y del tiempo de muestreo (p<0,001), no observándose interacción entre los factores (p=0,221). Por otra parte, se observaron mayores porcentajes de apoptosis en cuartos infectados respecto de sanos al día 21 de la involución (p=0,006), mientras que al día 7 (p=0,123) y 14 (p=0,679) no se observaron diferencias. En el estroma mamario, se observó un efecto significativo de la IIM (p<0,001) y del tiempo (p<0,001), no observándose interacción entre los factores (p=0,342). Los porcentajes de células apoptóticas fueron mayores en los cuartos infectados respecto a los no infectados en los tres períodos evaluados (p<0,05). A partir de los resultados obtenidos se puede concluir que los mayores porcentajes de proliferación y apoptosis observados, en cuartos infectados respecto a sanos, podría representar un intento de la GM para contrarrestar el daño causado por la infección crónica por S. aureus. Estas alteraciones podrían conducir a una disfunción de la GM y a una deficiente producción de leche.