La expresión de Fas-L esta involucrada en la apoptosis hepática observada durante la infección por Candida. albicans”.

RENNA MS; PORPORATTO C; PARAJE G,; CORREA SG; SOTOMAYOR CE.

Buenos Aires

Congreso; XVII Congreso Latinoamericano y X Congreso Argentino de Microbiología.; 2004

C.albicans es el principal  patógeno fúngico aislado en humanos, especialmente en individuos susceptibles y en pacientes inmunocomprometidos. La mucosa gastrointestinal es la puerta de entrada más frecuente para la diseminación hematógena de C.albicans y en esta etapa el hígado constituye una primera barrera de defensa. En nuestro laboratorio hemos desarrollado un modelo in vivo de candidiasis que permite evaluar el rol del hígado en el control temprano de esta micosis en animales normales e inmunocomprometidos. En este modelo la aplicación simultánea de un esquema de estrés modifica el estatus inmunológico del huésped y aumenta la susceptibilidad a la infección. Claros signos hepatotóxicos estuvieron asociados a la presencia del C.albicans; el estrés amplificó este fenómeno. Ratas Wistar se dividieron en 4 grupos: Normal(N), Estrés(E), infectadas con C.albicans(Ca) e infectadas-estresadas(CaE)  y sacrificadas a los 3 días. La presencia de apoptosis”in vivo” fue evaluada por las técnicas de DAPI y TUNEL, y la expresión de Fas-L sobre cortes de tejido y sobre la población purificada de linfocitos intrahepáticos. Células con morfología apoptóticas exhibiendo típica condensación de cromatina y fragmentación nuclear observadas luego de la tinción con DAPI, estuvieron presentes en los animales infectados (Ca y CaE), siendo más frecuentes en los animales expuestos al estrés. La cuantificación del fenómeno efectuada mediante el recuento de células TUNEL+/10000 hepatocitos confirmó estos hallazgos (Ca y CaE vs N p<0,03)(Ca vs CaE p<0.05). Una correlación directa ente el daño hepático y la carga fúngica (UFC Ca vs CaE p<0,001) fue observada. Es importante destacar que al presente, la presencia de apoptosis asociada a esta micosis no ha sido descrita. Señales intracelulares como las generadas vía  TNF-a/ TNF-areceptor  y Fas/ Fas-L gatillan la muerte por apoptosis; en este modelo observamos aumento en la expresión del mRNA intrahepático para TNF-a en ambos grupos de animales infectados (Ca y CaE). Es conocido que los hepatocitos expresan de manera constitutiva la molécula Fas en su superficie y que las células linfoides activadas tienen la capacidad de expresar la molécula Fas-L en su membrana, de modo que la interacción Fas-Fas-L estaría involucrada en la apoptosis de la célula hepática. En cortes hepáticos analizamos la expresión de Fas-L mediante la técnica de IF utilizando un AcMo contra Fas-L( Marca) y efectuando el recuento de células Fas-L+/10000 hep.  Los animales infectados evidenciaron un aumento de células Fas-L+ : 22+/10000 hep y 23 cel+/10000 hep (Ca y CaE respectivemente) respecto al grupo N (2+/10000 hep). La  cinética de reclutamiento de los linfocitos intrahepáticos purificados mediante gradiente de Percoll y estudiados por citometría de Flujo (FACS) confirmaron este importante hallazgo, indicando que la vía de Fas-L estaría también involucrada en el daño hepático y en la ocurrencia de apoptosis durante las etapas tempranas de la infección por C.albicans.