Alteración del metabolismo oxidativo y estimulación en la producción de oxido nítrico en células de la inmunidad innata por una lipasa de Candida albicans

PARAJE M.G; RENNA M.S; CORREA S.G; SOTOMAYOR CE

Buenos Aires

Congreso; XVII Congreso Latinoamericano y X Congreso Argentino de Microbiología. Organizado por la Asociación Argentina de Microbiología (AAM).; 2004

No está aún bien definido el rol que poseen las enzimas hidrolíticas fúngicas, como las lipasas, en la interacción biológica con el huésped y su rol en la patogenia del proceso infeccioso. Dentro de las células de la inmunidad innata los fagocitos se comportan como células efectoras que controlan el crecimiento del hongo. En nuestro laboratorio hemos desarrollado un modelo in vivo de infección y hemos purificado y caracterizado una lipasa extracelular de C.albicans (LIP) de 70 Kda de la cepa de trabajo. El objetivo de este estudio fue evaluar el efecto de LIP sobre dos vías metabólicas fundamentales de la célula macrofágica: una dependiente del oxígeno, mediante la evaluación de alteraciones de las especies reactivas del oxígeno (ROS) y otra dependiente de nitrógeno, por la capacidad de inducir la producción de óxido nítrico (ON) vía óxido nítrico sintetasa (iNOS). Para ello macrófagos purificados (1x106 cel/well) se cultivaron en presencia de dos concentraciones de LIP (25 U y 100 U). Para los estudios de estrés oxidativo la cinética de tiempo evaluada fue 6; 18; 24; 48 y 72 hs y la generación de ROS fue determinada por Quimioluminiscencia amplificada con luminol.  Alteraciones en la generación de los metabolitos del oxígeno se observaron entre las 6 y 48 hs de cultivo, con un valor máximo de 40 veces el nivel basal luego de12 hs de contacto LIP-célula para la menor concentración y de 10 veces  para 100 U. Forbol miristato (PMA) fue utilizado como control de activación. La generación de ON se evaluó en el sobrenadante del cultivo de macrófagos incubados a ambas concentraciones de la LIP a 18, 24, 48 y 72 h, mediante una técnica colorimétrica utilizando el método de Griess. La LIP fue capaz de gatillar la actividad de iNOS determinando una producción de significativa de ON a las 48 hs de cultivo a la mayor dosis, pero a dosis menores se fue necesario mayor tiempo de contacto para observar este fenómeno.    Estos resultados muestran que durante la interacción temprana de LIP con la célula inmune, este factor fúngico posee la capacidad de modificar  las vías metabólicas estudiadas. A tiempos cortos y baja concentración LIP modificó el metabolismo respiratorio de la célula. Un mayor tiempo de contacto fue requerido  para gatillar la producción del metabolito nitrogenado. Estos resultados indicarían que la célula inmune evaluada es sensible  al contacto con este metabolito fúngico lo que podría tener implicancias biológicas durante el proceso de colonización y persistencia del patógeno en el huésped.