Plataforma nanoestructurada en un inmunosensor microfluídico con detección fluorescencia inducida por láser aplicado al diagnóstico de cáncer de mama

FENÁNDEZ BALDO M.; SIRLEY V. PEREIRA; SIMIOLI ALEX; FRANCO A. BERTOLINO; JULIO RABA; GERMÁN A. MESSINA

La Plata

Congreso; VIII Congreso Argentino de Química Analítica; 2015

AAQA

Diversos nanomateriales se pueden utilizar como plataforma de inmovilización de biomoléculas e incorporarlos al desarrollo de biosensores, siendo esta una estrategia novedosa que permite una amplificación de la señal analítica y puede determinar concentraciones muy bajas de un analito de interés [1, 2]. El objetivo principal de nuestro trabajo fue sintetizar nanopartículas de óxido de zinc (ZnONPs) recubiertas por polivinilalcohol (PVA) e incorporarlas como plataforma en un inmunosensor microfluídico con detección LIF aplicado al diagnóstico de cáncer de mama a través de la determinación del biomarcador EpCAM. Este biomarcador es una proteína de superficie celular que se sobreexpresa en algunos cánceres de origen epitelial como lo es el de mama [3]. Las ZnONPs-PVA sintetizadas fueron caracterizadas por microscopía electrónica de barrido como de tansmisión y espectrometría de energía dispersiva. Posteriormente, estas nanopartículas fueron covalentemente unidas al canal central (CC) del inmunosensor mediante un proceso de salinización con 3-aminopropil trietoxisilano (3-APTES) y empleadas como plataforma para la inmovilización de anticuerpos monoclonales anti-EpCAM, quienes reaccionarán específicamente con el biomarcador EpCAM presente en muestras de sangre perisférica. Luego, la cantidad de EpCAM que reaccionó fue cuantificado por un segundo anticuerpo anti-EpCAM marcado con la enzima peroxidasa (HRP) usando 10-acetil-3,7-dihidroxifenoxazina (ADHP) como mediador enzimático. HRP cataliza la oxidación de ADHP (no fluorescente) a resorufina (HP, fluorescente), la cual fue medida por detección LIF usando lambda excitación a 561 nm y emisión a 585 nm. Los límites de detección para el método propuesto y un ELISA comercial que se utilizó para validar nuestro desarrollo fueron de 1,2 y 13,9 pg mL-1, respectivamente y los coeficientes de variación para los ensayos intra e inter día fueron menores que 6,5%.Finalmente, el inmunosensor microfluídico desarrollado con ZnONPs-PVA como plataformas integradas y detección LIF podría ser un método analítico específico y sensible para el diagnóstico de cáncer de mama.