Proteinasas digestivas de Neohelice granulata: adaptación a diferentes dietas

LANCIA, JUAN PABLO; FERNANDEZ-GIMENEZ, ANALIA; BAS, CLAUDIA

Bahia Blanca

Jornada; VlI Jornadas Nacionales de Ciencias del Mar; 2009

IAPSO, UNS, AACIMA, IADO

Neohelice granulata es un cangrejo cavador semiterrestre  que habita estuarios y marismas del Atlántico sudoccidental. Es considerado herbívoro y detritívoro, alimentándose alternativamente de la gramínea halófita del género Spartina que cubre estos ambientes, o de sedimento enriquecido en materia orgánica, en las planicies de marea sin vegetación de estas mismas áreas, dependiendo de dónde se encuentren las cuevas que habitan. Estas diferencias en la dieta hacen suponer una diferencia en la actividad enzimática de los cangrejos que habitan en las diferentes zonas de la marisma. Este trabajo tiene como objetivo corroborar dicha hipótesis, comenzando por las enzimas proteolíticas. Para caracterizar las enzimas digestivas se realizó un homogenato a partir del hepatopáncreas de cangrejos mantenidos en laboratorio alimentados con Spartina y con barro. Se evaluó: proteína soluble según el método de Bradford (1976). El pH óptimo usando buffer universal pH 6.5-10. La actividad proteinasa total según Garcia-Carreño (1992a). La actividad de tripsina, usando BAPNA y la de quimotripsina, con SAPNA como sustratos específicos; los resultados fueron expresados como el cambio de absorbancia min-1 mg-1. La separación de las proteínas en los preparados enzimáticos, fue realizada por electroforesis en gel de poliacrilamida (SDS-PAGE) acorde a Laemmli (1970). Luego, los geles fueron puestos en contacto con caseína, lavados y teñidos con Coomassie Blue. Zonas claras sobre un fondo azul indicaron actividad proteinasa. Soluciones de TLCK, TPCK (inhibidores de tripsina y quimotripsina respectivamente) y SBTI y PMSF (inhibidores de serinproteinasas) fueron adicionadas a los extractos enzimáticos para  determinar la identidad de las enzimas que provocaron dichas zonas de actividad en el gel.  El pH óptimo varió entre 7,5 y 8. La actividad específica, tanto para tripsina como para quimiotripsina fue diferente entre sexos y entre tipos de alimentación. En ambos casos la actividad en hembras fue mayor que en machos y en individuos alimentados con Spartina mayor que con barro. Se detectaron 8 fracciones proteínicas en el gel por electroforesis desde 76 a 14 kDa de peso molecular de las cuales 3 presentaron actividad proteinasa (35,8; 15 y 13,9 kDa). Las dos más livianas pertenecen a la familia de las tripsinas y la más grande es una serinproteasa diferente a tripsina o quimotripsina. Se evidencia una adaptación fisiológica de la actividad proteolítica digestiva a fin de maximizar la digestión de escasa cantidad de proteínas en la Spartina.