Implicancia del estrés oxidativo inducido por la Terapia Fotodinámica en la fosforilación de ERK1/2 y su participación en la activación de HIF

LAMBERTI MJ; RUMIE VITTAR NB; RIVAROLA VA

Congreso; SAIC; 2015

La terapia fotodinámica (TFD) consiste en la aplicación de compuestos fotosensibilizadores (FSs) activables por luz de una determinada longitud de onda. El daño celular es producido por la formación de especies reactivas del oxígeno (ROS). En estudios previos demostramos que las ROS inducidas por la TFD incrementan la actividad del factor inducible por hipoxia (HIF) en cultivos hipóxicos de carcinoma colorrectal (CCR). HIF es un factor de transcripción activado en respuesta a la disminución de la presión de O2 e involucrado en múltiples vías de supervivencia,. El rol que juegan las ROS en controlar la actividad de HIF involucra diversas señalizaciones intercelulares. Por ello, se propuso evaluar el rol del estrés oxidativo desencadenado por la TFD como estimulador de las vías PI3K/Akt y RAF/MEK/ERK, ambas involucradas en la regulación de HIF-1. Los esferoides de SW480-HRE (células de CCR reporteras de la actividad de HIF) fueron sometidos a condiciones letales del tratamiento fotodinámico, y se evaluó la activación de Akt y ERK1/2 (Western Blot), lo que demostró que sólo la vía de supervivencia ERK1/2 fue regulada positivamente por la intervención fotodinámica. Con el fin de determinar si la fosforilación inducida sobre ERK1/2 es relevante en la activación de HIF y en la adquisición de sensibilidad al tratamiento, los cultivos se incubaron con el inhibidor de dicha vía (U0126). Los resultados demostraron que la inhibición selectiva de ERK1/2 indujo una disminución de la actividad de HIF (citometría de flujo), así como un aumento en la susceptibilidad al tratamiento (MTT). A continuación, se demostró que la inhibición del estrés oxidativo (antioxidante NAC) suprimió la activación de la vía RAF/MEK/ERK (Western Blot). Estos resultados permitieron identificar por primera vez el eje TFD→ROS→ERK1/2→HIF, y la influencia de estos mediadores moleculares en la sensibilidad a la TFD de los microtumores de CCR.