ESTUDIOS DE ADHESIÓN CELULAR SOBRE HIDROGELES DE PNIPAM Y CO-POLÍMEROS

CAPELLA V; ALUSTIZA FE; RIVERO R; OLMOS NICOTRA MF; MIRAS M; BARBERO C; BOSCH P; RIVAROLA C; RODRIGUEZ N

Córdoba

Congreso; XLVII Reunión Anual de Farmacología Experimental; 2015

Los hidrogeles son polímeros entrecruzados con gran capacidad de absorción de soluciones acuosas, razón por la cual se emplean y estudian actualmente dentro del campo de la biomedicina, con especial interés en la medicina regenerativa y en el transporte y liberación de drogas. En primera instancia resulta necesario demostrar la biocompatibilidad de los hidrogeles in vitro. El objetivo del presente trabajo fue evaluar la adhesión de fibroblastos fetales bovinos (FFB) sobre la superficie de hidrogeles termosensibles con diferentes características fisicoquímicas, sintetizados mediante polimerización radicalaria. Las superficies se basan en el monómero termosensible N-isopropilacrilamida (NIPAm) y su co-polimerización con un monómero aniónico AMPS (ácido 2-acrilamido-2-metilpropilsulfónico), neutro HMA (N-[Tris (hidroximetil) metil] acrilamida) o catiónico CAT (3-(acrilamidopropil) cloruro de trimetil-amonio). Se analizaron hidrogeles de PNIPAM, PNIPAM-co-2% AMPS, PNIPAM-co-10% AMPS, PNIPAM-co-20% HMA y PNIPAM-co-10% CAT, sobre los cuales se sembraron FFB transgénicos (105 células/superficie) que expresan la proteína verde fluorescente (Green Fluorescent Protein - GFP). La adhesión sobre los diferentes hidrogeles se observó en microscopio invertido UV-visible durante un período de 8 días y se evaluó a través de cuantificación de la fluorescencia, emitida por dichas células, utilizando el software Image J I.45S (NIH). Además se evaluó cualitativamente la deposición de colágeno sobre dichos geles mediante tinción con el colorante Sirius Red F3B (Direct Red 80) luego de 8 días de cultivo. En hidrogeles de PNIPAM-co-10% AMPS y PNIPAM-co-20% HMA se observó una mayor adhesión de los FFB durante los primeros días y mayor proliferación celular en los días siguientes. En hidrogeles de PNIPAM-co-2% AMPS se observó baja adhesión y formación de colonias a las 24 horas, con aumento de adhesión y proliferación a partir de las 48 horas. De manera similar, el estudio de deposición de colágeno mediante el colorante Sirius Red F3B fue mayormente observado sobre los polímeros PNIPAM-co-10% AMPS y PNIPAM-co-20% HMA comparado con PNIPAM-co-2% AMPS, a igual tiempo de cultivo. Estos resultados preliminares, sumados a estudios de viabilidad mediante MTT realizados previamente, indican que los hidrogeles estudiados son biocompatibles y posibles candidatos para aplicaciones en el campo de la medicina regenerativa e ingeniería de tejidos.