PERSONAL DE APOYO
OLMOS NICOTRA Maria Florencia
congresos y reuniones científicas
Título:
Enhancement of Transfection Efficiency of Fetal Bovine Fibroblast by Manipulation of the Cell Cycle
Autor/es:
ORTEGA NM; BARRIONUEVO BE, ; GUIDO CB; OLMOS MF ; FILI A; FORCATO DO ; BOSCH P.
Lugar:
Buenos Aires
Reunión:
Jornada; XII Jornadas Anuales de la Sociedad Argentina de Biología; 2010
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Biología
Resumen:
El éxito de la transfección transitoria y estable de las células en cultivo representa la primera etapa de muchas estrategias transgénicas basadas en la transferencia nuclear de células somáticas (TNCS). Por lo tanto, se hace necesario desarrollar métodos más eficientes y fiables para transfectar células bovinas en cultivo. Se estudió el efecto de un agente bloqueante de la mitosis, la colchicina, sobre la transfección transitoria de fibroblastos fetales bovinos (FFBs) con un plásmido (pZsGreen1-N1) portador de un casete de expresión de una proteína reportera fluorescente. La transfección se realizó en presencia de distintos agentes de transfección: GeneJammer (Stratagene) o FuGene (Roche) en cultivos de FFBs previamente expuestos a concentraciones crecientes de colchicina (0-40 ng/mL), durante diferentes tiempos (3-12 hs). Observamos un efecto positivo del pretratamiento con colchicina sobre la eficiencia de transfección, cuando los cultivos fueron expuestos a 10 ng de colchicina/mL por 6 hs, evidenciado por un incremento significativo en el porcentaje de células fluorescentes. Altas dosis de colchicina y/o periodos largos de incubación produjeron citotoxicidad. Se requerirán estudios adicionales para definir las condiciones que maximicen la eficiencia de transfección de FFBs y la normalidad cariotípica en células pretratadas con colchicina. Los resultados de este estudio sientan las bases para el desarrollo de estrategias que mejoren la transfección de FFBs para aplicaciones biotecnológicas.
