Producción de la nucleoproteína (NP) del virus de la gripe mediante el sistema de baculovirus recombinante

CARGNELUTTI, DIEGO ESTEBAN; ÁLVAREZ, PAULA; BOADO, LORENA; SANCHEZ, M.VICTORIA; MATTION, NORA; SCODELLER, EDUARDO

Buenos Aires

Congreso; IX Congreso Argentino de Virología; 2008

SAV

  Introducción:El virus de la gripe es un patógeno respiratorio que produce altos índices de morbilidad y mortalidad. La gran mayoría de las vacunas trivalentes actualmente en uso contienen las proteínas de la envoltura viral obtenidas a partir de virus purificado que se producen en huevos de gallina. Esta vacuna induce principalmente anticuerpos contra la hemaglutinina viral capaces de proteger individuos vacunados de la infección viral. Cambios en la antigenicidad de las glicoproteínas virales limita la efectividad de los programas actuales de vacunación. Se ha demostrado que gran parte de la respuesta inmune celular inducida por una infección viral esta dirigida contra la nucleoproteína viral (NP). La estructura antigénica de esta proteína es mucho más conservada que la de las glicoproteínas de envoltura. El siguiente proyecto está orientado a obtener vacunas de nueva generación contra la gripe a partir de la NP de los tipos virales A y B, expresadas por baculovirus recombinantes en células de insectos (Spodoptera frugiperda). Metodología: -Obtención de una copia de cADN de ARN genómico específicos para NP. Amplificación de cADNs. Inserción de los fragmentos obtenidos en el plásmido pGEM-T , producción de ADN a partir de cultivos de E. coli TOP 10 y purificación del pGEM-T-NP. -Secuenciamiento de los genes clonados. Inserción de los genes de NP en el vector de transferencia pFastbac, transformación E. coli TOP 10, producción y purificación del vector de transferencia, pFastBac-NP. -Transformación de E.coli DH10Bac competentes con pFastBac-NP: En este evento se genera un baculovirus recombinante que lleva el gen de la NP, AcNPV-NP, bajo el promotor de la Polihedrina viral. -Obtención de baculovirus recombinantes: Transfección de células  Spodoptera frugiperda, (SF9) usando lípido catiónico, Cellfectin. -Optimización de la producción de proteínas recombinantes en cultivos de células de insecto. Desarrollo de una metodología de purificación de la proteína recombinante. Conclusión: La producción de NP mediante este sistema, podría ser usada como antígeno vacunal ideal contra la gripe, induciendo una cobertura más amplia contra una variedad de cepas. El uso de nuevos adyuvantes y sistemas de delivery junto a la NP, lograría una vacuna ideal, económica y fácil de producir.