El Ácido araquidónico modifica la modulación del canal BK por la subunidad β1: efectos sobre la activación del sensor de voltaje y la apertura intrínseca del canal

MONCADA, M; MARTÍN, P; ENRIQUE, N; MILESI, V

La Plata

Congreso; Reuniòn anuela de la Sociedad Argentina de Fisiología 2016; 2016

SAFIS

El Ácido araquidónico(AA) es un ácido graso poliinsaturado involucrado en la modulación de laactividad de numerosos canales iónicos. Anteriormente reportamos que el AA 10µM activa al canal de K+ de alta conductancia Ca2+- yvoltaje-dependiente (BK) cuando la subunidad α del canal se expresa junto a lasubunidad regulatoria β1, generando un cambio en la dependencia de laactivación por el voltaje (desplaza la curva G-V hacia la izquierda,  ΔV1/2 = -55.2 ±4.4 mV, n=3, p<0.05), el cual no se observa en ausencia de subunidades regulatorias β (Moncadaet al 2014).En este trabajo,profundizamos el mecanismo de acción del AA usando la técnica de patch clamp sobre el canal expresado encélulas HEK. Para verificar si el efecto del AA es directo o mediado por susmetabolitos, evaluamos su acción cuando sus enzimas metabolizadoras seencuentran farmacológicamente bloqueadas (CDC, indometacina, 17-ODYA).Observamos que el AA continúa activando al canal (n=8). Teniendo en cuentaque la subunidad β1 modula el sensor de voltaje y la apertura intrínseca delcanal, analizamos si el AA activa al canal modificando la modulación por β1 deestos procesos. Para ello, midiendo las corrientes de compuerta del canal,evaluamos si el sensor del voltaje está afectado por el AA. Observamos que elAA desplaza la curva Q-V hacia la izquierda (∆V1/2= -17.2 ±8.1 mV,n=5, p<0.05). Sabiendo que  losresiduos Y74 y S104 del loopextracelular de β1 están involucrados en la regulación del sensor de voltajepor esta subunidad, evaluamos el efecto del AA en los mutantes Y74A y S104A,que presentan pérdida de función. Se observó una disminución significativa enel efecto del AA sobre el canal expresado con β1Y74A (β1wt: ∆V1/2=-43.37±5.75 mV, n=6; β1Y74A: ∆V1/2= -22.56 mV ±2.7, n=8; p=0.015),mientras que con β1S104A no se vio modificación respecto a β1wt. Por otro lado,estudiamos si el AA activa modificando también la apertura intrínseca del canal(NPoi). Los resultados obtenidos muestran un aumento de la NPoi frente al agregadodel AA en todas las células ensayadas (n=4).Estos datos nospermiten proponer que la activación del canal BK por el AA es directa, requierede la presencia de la subunidad β1 e involucra la modificación de dos procesos:la apertura intrínseca del canal y la activación del sensor de voltaje. Además,los datos sugieren la participación del residuo Y74 de β1 en la activación delcanal.