ACTIVACIÓN DEL CANAL BK EN LA ACCIÓN VASODILATADORA CRÓNICA DE LOS DIURÉTICOS TIAZÍDICOS: ROL DE LA SUBUNIDAD ACCESORIA BETA - 1

MARTÍN, P; MONCADA, M; ASUAJE, A; MILESI, V

Córdoba

Congreso; - REUNION CONJUNTA: XLVII REUNION ANUAL DE LA SOCIEDAD ARGENTINA DE FARMACOLOGÍA EXPERIMENTAL (SAFE), VI CONGRESO IBEROAMERICANO DE CIENCIAS FARMACEUTICAS (COIFFA), III CONGRESO SUDAMERICANO DE BIOFARMACIA Y FARMACOCINÉTICA (BFFC); 2015

SAFE, COIFFA, CEBIOBE

La hipertensión arterial (HTA) esuno de los principales factores de riesgo de enfermedad cardiovascular. Sutratamiento con diuréticos tiazídicos está basado en la disminución de lavolemia y en una vasodilatación directa. Nuestro objetivo es estudiar elmecanismo vasodilatador del diurético hidroclorotiazida (HCTZ), cuyo mecanismoes aún desconocido. Estudios previos indican que la activación del canal de K+de alta conductancia operado por voltaje y Ca2+ (BK) podría estar implicadaen este efecto. Este canal puede estar acompañado de subunidades accesoriassegún el tipo celular que le confieren características farmacológicasespecíficas. La subunidad beta-1 es la mayormente expresada en el células demúsculo liso (CML). Utilizando la técnica de patch-clamp analizamos la acción de la HCTZ sobre el canal BKexpresado (con y sin la subunidad beta-1) en células HEK293 T (sistema deexpresión heterólogo) y CML de la arteria umbilical humana (CMLAUH) comosistema nativo. Utilizando la configuración de whole-cell (célula completa) en células HEK transfectadas con elcanal BK y su subunidad beta-1 observamos que la HCTZ agregada en la soluciónextracelular incrementó la corriente del canal de manera dependiente de laconcentración (% de aumento de corriente a +40mV: 31.0±4.7; 95.4±25.7 y193.5±47.2 % a HCTZ 10, 30 y 100 µM respectivamente, P<0.05; n: 5-8). Sinembargo, la HCTZ no modificó la actividad del canal cuando fue evaluada en lasmismas células en configuración de inside-outdonde hay ausencia de la integridad celular (% de aumento de corriente a +90mV:6.3±15.0; 12.8±38.1; -17.8±12.7 % a HCTZ 10, 30 y 100 µM respectivamente, NS;n: 3-7), sugiriendo una acción indirecta del diurético sobre el canal. Además,registramos el efecto de la HCTZ sobre las corrientes whole-cell de células HEK transfectadas con el canal BK en ausenciade la subunidad beta-1. Llamativamente y a pesar de ser una activaciónindirecta, observamos que la misma requiere la presencia de esta subunidad. En suausencia la HCTZ no modifica la corriente BK (% de aumento de corriente a+40mV: 13.9±15.7 y 6.9±5.1 % a HCTZ 100 y 300 µM respectivamente, NS; n: 3-4). Finalmente,esta serie experimental fue repetida para la HCTZ 10 µM ensayándose en CMLAUH,donde el canal está expresado en presencia de beta-1 y además está sometido alos factores de regulación post-transcripcionales. Consistentemente con losresultados del sistema heterólogo, la aplicación extracelular de HCTZ provocóuna activación significativa de la corriente BK registrada en configuración dewhole-cell (de 528±215 a 1379±132pA a+40mV, n: 4, P<0.05) mientras que, aplicado en configuración de inside-out no produce cambios en laprobabilidad de apertura del canal (NPo a +40mV: 0.0114±0.0015 (control) vs0.0135±0.0037 (HCTZ), n: 7, P>0.05). Estos resultados indicarían que losefectos vasodilatadores de la HCTZ podrían deberse una activación indirecta delcanal BK dependiente de la presencia de la subunidad beta-1.