Susceptibilidad a peróxido de hidrógeno aumentada en cepas resistentes a ciprofloxacina

V. AIASSA, A. I. BARNES, I. ALBESA

Buenos Aires

Congreso; II Congreso Latinoamericano de Microbiología de Medicamentos; 2009

Asociación Argentina de Microbiología

El uso de desinfectantes está incluido en las buenas prácticas de tipo industrial yhospitalario. En los nosocomios es necesario controlar la carga microbiana,evitando la diseminación de cepas resistentes a los antimicrobianos de uso másfrecuente, tales como la ciprofloxacina (CIP). Por tal motivo se investigó laefectividad del peróxido de hidrógeno (H2O2) para eliminar Proteus mirabilis, yaque es una bacteria que posee una poderosa capacidad antioxidante articuladapor vías enzimáticas y no enzimáticas. Catalasa (CAT) es la enzima encargadade la descomposición del H2O2 en agua y oxígeno, que puede estar disminuidacuando está incrementada la superóxido dismutasa (SOD), quien consume elanión superóxido. Además, en los últimos años se ha visto que CIP causa estrésoxidativo en bacterias, conduciendo al aumento de especies reactivas deloxígeno (ROS), con la consiguiente inducción del incremento de SOD. Por ello seplanteó como objetivo investigar la respuesta al H2O2 exógeno en cepas de P.mirabilis resistentes a CIP en relación con la actividad CAT y SOD que presentanestas variantes resistentes (VR).Inducción de resistencia a CIP: Se trabajó con dos cepas “wt” de P. mirabilissensibles (1 y 2) a partir de las cuales se seleccionaron las VR (1X, 1Y, 2X y 2y)mediante pasajes sucesivos en concentraciones subinhibitorias delantimicrobiano (0,0625 μg/ml) y reaislamiento en Agar Müeller Hinton conconcentraciones superiores a la CIM de CIP (4 CIM y 6 CIM).Determinación de la actividad CAT: Se incubó una suspensión bacteriana conH2O2 por 2 h a 37ºC, se adicionó ácido acético (inhibidor de la actividad CAT) ydicromato de potasio que reaccionó con el H2O2 dando un precipitado de ácidopercrómico, el que se disolvió a 100°C y se valoró a 570 nm.Sensibilidad al H2O2: Se distribuyó 100μl de una suspensión bacteriana de DO6000,4 en placas de CLDE, se colocaron discos de papel Whatman N°1impregnados con 10 μl de H2O2 30% (v/v) por triplicado. Se incubó 24 h a 37°C yse midieron los halos de inhibición alrededor del disco.Actividad SOD: Se ensayó por la técnica de irradiación en presencia deriboflavina, metionina y NBT en cultivos de 24h, por espectrofotometría a 540mm.Los resultados mostraron un aumento de la sensibilidad al H2O2 en todas las VR,siendo este incremento significativo en las VR derivadas de la cepa 2. Encondiciones basales se evidenció menor actividad CAT en las VR, siendo ladiferencia respecto a la “wt” significativa en las VR que mostraron mayorsensibilidad al H2O2 mientras que la actividad SOD fue mayor en las VR.Los resultados obtenidos destacan la importancia de utilizar H2O2 en ladesinfección de cepas resistentes a CIP, ya que existe correlación entre mayorsusceptibilidad a H2O2, menor actividad CAT, mayor SOD y mayor resistencia aCIP.