Análisis de biofilms formados por Xanthomonas campestris pv. campestris mediante Espectroscopia de Impedancia Electroquímica

SAAD LUCIA; YARYURA PABLO; COMBA FAUSTO; BIANCO MI; FIORITO PABLO; MOLINA PATRICIA G

Santa Rosa, La Pampa

Congreso; 10º Congreso Argentino de Química Analítica; 2019

Análisis de biofilms formados por Xanthomonas campestris pv.campestris mediante Espectroscopía de Impedancia electroquímica.Los biofilms son ecosistemas microbianos organizados, conformados por una o varias especies de microorganismos asociados a una superficie viva o inerte, con características funcionales y estructurales complejas. Este tipo de conformación microbiana ocurre cuando las células planctónicas se adhieren a una superficie o sustrato, formando una comunidad, que se caracteriza por la excreción de una matriz extracelular adhesiva protectora1-2. En este trabajo se incursionó en la utilización de la espectroscopía de impedancia electroquímica (EIS) como herramienta para el análisis comparativo de los biofilms desarrollados por cepas de X.campestris pv. campestris (Xcc) .El objetivo es estudiar la aplicabilidad de espectroscopia de impedancia electroquímica en el estudio de biofilms bacterianos y evaluar las diferencias entre los biofilms producidos por tres cepas diferentes 3. Una de las aplicaciones analíticas de esta técnica es poder utilizarla para estudiar la interacción de metales dentro de la matriz del biofilm4-5.Las cepas de Xcc usadas fueron XcFC2 (cepa salvaje, WT, productora del poli-pentasacarido xantano), Xc1231 (cepa no productora de exopolisacárido) que no producte biofilm y XcI (cepa productora de poli-tetrasacárido) que forma un biofilm más compacto. Los biofilms fueron generados por la incubación de las bacterias en medio mínimo, sobre los electrodos de oro, producidos en nuestro laboratorio, en cubetas espectrofométricas plásticas de 1,5 ml. Se sembró un volumen de 1 ml de una suspensión bacteriana con una densidad óptica de 0,1 y se las incubó en estufa a 28°C durante 72 hs. Para los estudios electroquímicos se utilizaron las técnicas de voltamperometría cíclica (VC) y EIS, utilizando una mezcla de K3Fe[CN6] 2.10-3 M y K4Fe[CN6] 2.10-3 M como cuplaredox. A partir de los experimentos de EIS se calcularon las resistencias a la transferencia de carga (Rtc) para cada biofilm formado por las cepas estudiadas, en donde se encontraron diferencias significativas. Los datos obtenidos se corresponden con la caracterización por microscopía confocal3 de los biofilms formados por las cepas estudiadas, donde los valores de mayor Rtc corresponden a biofilms más densos. Los resultados de VC refuerzan estos datos ya que se observan comportamientos más resistivos en las cepas con biofilms más densos. De esta forma demostramos que las técnicas de VC y EIS pueden ser utilizadas para los análisis cualitativos de los biofilms bacterianos como técnica complementaria a la microscopía confocal.1 Joe J. Harrison, Howard Ceri. American Scientist, Vol. 93, No. 6. pp. 508-515.2 Lappin-Scott H., Burton S., Stoodley P. Nature Reviews Microbiology. 2014.3 Bianco M.I., Vojnov A.A. MPMI Vol. 29, No. 9, 2016, pp. 688?699.4 Favaro M.A, Gariglio N.F. Crop Protection 92 (2017) 182-1895 Pernezny K., Sanchez J. Crop Protection 27 (2008) 256?262