Influencia del agua en la esterificación enzimática de ketoprofeno racémico con etanol sin co-solvente agregado

MARÍA VICTORIA TOLEDO; CARLOS R. LLERENA-SUSTER; CLAUDIA RUSCITTI; SEBASTIÁN E. COLLINS; LAURA E. BRIAND

La Plata

Jornada; V Jornadas en Ciencias Aplicadas "Dr. Jorge J. Ronco"; 2019

CINDECA - CONICET-CIC-UNLP

Las lipasas son las enzimas más comúnmente usadas para producir dexketoprofeno mediante resolución cinética. Este isómero es farmacológicamente activo, por lo que su obtención de forma pura disminuiría los efectos adversos del AINE. En reacciones enzimáticas, el agua ayuda a mantener la conformación tridimensional catalíticamente activa de las enzimas, contribuye a la estabilidad y flexibilidad proteica. Sin embargo, presenta algunos aspectos negativos como inhibición e influencia en la enantioselectividad. Por esto, es fundamental la determinación de la cantidad óptima de agua.En este trabajo se estudió el efecto del agua añadida en la resolución cinética de ketoprofeno racémico con etanol catalizada por la lipasa B de Candida antarctica (CALB)en determinadas condiciones de reacción y a nivel molecular. La reacción se llevó a cabo a 45 °C durante 24 h con el biocatalizador comercial Novozym® 435. Se agregaron distintos porcentajes de agua al medio de reacción desde 0.5 a 10 % (v/v) y se observó un aumento enla actividad específica, la relación enantiomérica, el factor enantiomérico y el exceso enantiomérico hacia dexketoprofeno. A nivel molecular, la relación del intercambio isotópico H/Dde la amida de CALB demostró que la enzima expuesta a etanol deshidratado posee sitios de alta flexibilidad y la adición de agua disminuye la relación del intercambio H/D alterando la flexibilidad. Estudios adicionales sobre la estructura secundaria sugieren que la estructura de láminas βconduce a sitios H-amida de intercambio más lentos.