IDENTIFICACIÓN DE INTERMEDIARIOS DE LA SÍNTESIS DE UNA MELANINA FÚNGICA POR ESPECTROMETRIA DE MASA

BARCENA ALEJANDRA; PETROSELLI GABRIELA; ERRA BALSELLS ROSA; ESTEVEZ JOSE; BALATTI PEDRO; SAPARRAT MARIO

Los Cocos

Congreso; Segundo Congreso Argentino de Espectrometría de Masa; 2014

SAEM

Las melaninas son pigmentos oscuros sintetizados por un amplio espectro de organismos. Estos polímeros, químicamente complejos, cumplen roles de protección ante situaciones de stress y tienen propiedades de interés. Pseudocercospora griseola es un hongo patógeno de poroto (Phaseolus vulgaris) que se caracteriza por desarrollar micelio y esporas pigmentados. En estudios previos utilizando inhibidores específicos suplementados al medio de cultivo se determinó que el tipo de melanina que sintetiza este hongo es 1,8-dihidroxinaftaleno (DHN). El objetivo de este trabajo fue identificar los intermediaros claves de la vía de síntesis de la melanina en P. griseola utilizando MALDI-TOF MS (Matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry). Para ello, el hongo se cultivó sobre un medio basal y en presencia de 100 µg ml-1 de Triciclazole (inhibidor de las reductasas involucradas en la síntesis de melanina DHN) a 24°C en oscuridad durante 21 días. Los cultivos suplementados con Triciclazole mostraron una coloración diferente en el micelio y en el medio de cultivo como resultado de la acumulación de cromóforos anaranjados. La extracción de los metabolitos intermediaros a partir del micelio desarrollado en los dos medios se llevó a cabo con acetato de etilo durante dos periodos de tiempo (2 y 24 horas). Para medir los espectros MALDI-MS se utilizó como matriz ácido gentísico. Debido a que las soluciones aisladas de esas cepas poseen absorción a 350 nm, se registraron además espectros de masa UV-LDI, es decir sin el agregado de una matriz. En los espectros de masa realizados con los extractos obtenidos desde el micelio crecido en presencia de Triciclazole (tanto después de 2 y 24 horas de extracción) se identificó flaviolina, un producto de autoxidación del 1,3,8-trihidroxinaftaleno (1,3,8-THN), un intermediario clave en la síntesis de la melanina DHN. Se confirmó la estructura de flaviolina mediante espectros MS/MS. No obstante, este metabolito no se detectó en extractos derivados de cultivos control. Estos resultados confirman la naturaleza DHN de la melanina de este hongo.