Caracterización estructural de surfactinas, iturinas y fengicinas producidas por cepas de Bacillus spp. con actividad anti Escherichia coli utilizando MALDI MS/MS

PETROSELLI GABRIELA; HUARACHI, SERGIO FERNANDO; AUDISIO, MARCELA CARINA; ERRA BALSELLS ROSA

San Luis

Congreso; IV Congreso Argentino de Espectrometría de Masa (IV CAEM); 2022

Sociedad Argentina de Espectrometria de masa

Las bacterias del género Bacillus producen metabolitos con actividad biológica, destacándose enzimas, antibióticos y lipopéptidos. Los lipopéptidos son péptidos cíclicos que se clasifican de acuerdo a la longitud y composición de su cadena peptídica como surfactinas, iturinas, fengicinas, entre otras familias. En este trabajo se describen los lipopéptidos producidos por las cepas Bacillus subtilis subsp. subtilis C4 y Bacillus amyloliquefaciens B31aisladas de miel y de desechos de una curtiembre artesanal, respectivamente. Estas cepas resultaron de interés por tener actividad inhibitoria frente a cepas de Escherichia coli enteropatógenas de origen clínico. El objetivo del trabajo fue la obtención de perfiles (huellas dactilares) de la mezcla de lipopéptidos y el estudio de la fragmentación de homólogos sobre las mismas muestras.Las cepas B. subtilis subsp. subtilis C4 y B. amyloliquefaciens B31se incubaron en medio Luria Bertani durante 6 días a 37 ºC sin agitación. Las muestras analizadas por espectrometría de masa UV MALDI fueron los sobrenadantes libre de células (SLC) y las fracciones de lipopéptidos (FL). Estos últimos fueron obtenidos a partir del SLC por precipitación ácida y posterior extracción con solvente (metanol). Los espectros se obtuvieron en modo de detección iónico positivo utilizando norharmano como matriz. La asignación de la estructura fue realizada a partir de los pesos moleculares y de la correspondiente fragmentación observada (UV-MALDI-MS/MS; modo LIFT). El conjunto de señales observadas en los espectros MS/MS se asignó considerando que en simultáneo ocurrieron dos tipos de fragmentaciones diferentes. Adicionalmente para la asignación de los diferentes homólogos, se utilizó información disponible en bibliografía para otras cepas de Bacillus.1-3A partir de los espectros MS obtenidos se concluyó que ambas cepas producen mayoritariamente homólogos de surfactinas, pero que se diferencian en el número y la intensidad relativa de lipopéptidos pertenecientes a las familias de kurstakinas, iturinas y fengicinas. Los espectros MS/MS fueron fundamentales para realizar la asignación de ciertos homólogos producidos por B31 y C4, demostrando que las cepas estudiadas producen diferentes isoformas pertenecientes a la familia de iturina que fueron detectados a igual valor de m/z (B. amyloliquefaciens B31 produce C16-bacillomicina D mientras B. subtilis subsp. subtilis C4 produce C15-iturina C).