Análisis por UV-MALDI MS de los lipopéptidos sintetizados por cepas de Bacillus spp. en presencia de Rhizoctonia solani en medio sólido

PETROSELLI GABRIELA; SABATÉ, DANIELA C.; PEREZ BRANDAN CAROLINA; AUDISIO M. CARINA; ERRA BALSELLS ROSA

San Luis

Congreso; IV Congreso Argentino de Espectrometría de Masa (IV CAEM); 2022

Sociedad Argentina de Espectrometría de Masa

El cultivo de poroto (Phaseolus vulgaris L.) se encuentra entre los más importantes en la región noroeste de Argentina. El poroto es afectado por el hongo Rhizoctonia solani produciendo pérdidas económicas debido a su difícil control. Hace varios años se evalúa el uso de microorganismos antagonistas para el control biológico de patógenos de plantas como una opción ecológica para la sustitución de los pesticidas químicos.1 En ese sentido, las bacterias del género Bacillus son usadas para el control biológico ya que producen un gran número de antibióticos peptídicos, así como metabolitos secundarios tales como lipopéptidos con fuerte actividad antifúngica, como son las iturinas, bacitracinas y fengicinas.2 En este trabajo se evaluó la actividad inhibitoria de dos cepas del género Bacillus aisladas de suelo (Bacillus sp. P12 y B. subtilis subsp. subtilis B19) frente a cinco cepas de R. solani y se caracterizaron los metabolitos producidos por esas bacterias incubadas en medio sólido en presencia del hongo utilizando UV-MALDI MS.Se evaluó el efecto inhibitorio de las cepas P12 y B19 con la técnica de cultivo dual en medio PDA (agar papa dextrosa) y se extrajo un tapón de 4 mm de la zona de inhibición para la realización de los análisis por UV-MALDI MS. Esa muestra se suspendió en agua pH 8 y se agitó vigorosamente durante 30 s. Los espectros se obtuvieron en modo de detección iónico positivo utilizando norharmano como matriz y -ciclodextrina como calibrante externo. La asignación de la estructura fue realizada a partir de los pesos moleculares e información disponible en bibliografía para otras cepas de Bacillus.3,4Se encontró que la actividad inhibitoria de Bacillus B19 y P12 dependió de la cepa fitopatógena de R. solani evaluada, pero presentaron rangos de inhibición fúngica (IF) cercanos, que variaron entre 60-75 y 65-73 % aproximadamente, respectivamente. La cepa R. solani 4 resultó la más sensible, mientras la cepa R. solani 6 resultó ser la más resistente. Utilizando UV-MALDI MS se detectaron señales en la zona de m/z 900-1650, las cuales correspondieron a lipopéptidos identificados como homólogos de surfactinas, iturinas, polimixinas y fengicinas. Los perfiles obtenidos para ambas cepas son significativamente diferentes. Por un lado, los espectros de P12 presentan mayor intensidad de señales en el rango de de m/z 1000-1200 correspondiente a los homólogos de surfactinas, iturinas y polimixinas, por el contrario, en los espectros de B19 se detectaron en mayor número y con mayor intensidad relativa de las señales en el rango m/z 1450-1650 correspondiente a homólogos de fengicinas y no se detectaron polimixinas.