Caracterización de cultivos primarios de células ganglionares de retina embrionaria

NIETO PAULA S; CONTÍN MARÍA A; GUIDO MARIO E

Los Cocos, Córdoba, Argentina

Congreso; Sociedad Argentina de Neuroquímica (SAN); 2003

Los ritmos biológicos regulan la fisiología y el comportamiento de la mayoría de los organismos vivos y son generados por un sistema complejo de osciladores. En los animales superiores el núcleo supraquiasmático (NSQ) es el reloj central que sincroniza a los osciladores periféricos. A su vez, el NSQ es sincronizado al fotoperiodo terrestre para lograr una mejor adaptación al medio ambiente. En las aves, el NSQ, la retina y la glándula pineal son componentes fundamentales del sistema circadiano, con distintas jerarquías dependiendo de la especie. Si bien conos y bastones son las células encargadas de la fotorecepción visual, en mamíferos se ha observado que existe una subpoblación de células ganglionares (CGRs) que proyectan al NSQ que son fotosensibles y que poseen un fotopigmento denominado melanopsina. Se postula que éstas células son las responsables de la fotorrecepción circadiana. En nuestro laboratorio se observó que las células ganglionares son capaces de sintetizar melatonina en forma rítmica y autónoma con niveles máximos durante el día. Se desea estudiar el comportamiento fisiológico de dichas células ganglionares y su potencial capacidad fotorreceptora intrínseca. Para lograr este objetivo es necesario encontrar condiciones adecuadas para obtener células ganglionares purificadas del resto de las células retinales. En el estadio embrionario de 8 días (E8) las únicas células diferenciadas en la retina de pollos son las células ganglionares (CGRs). Estas células expresan una glicoproteína de membrana llamada Thy-1, que constituye un antígeno ideal para inmunopurificación de las CGRs. Además, las células embrionarias tienen la capacidad de mantenerse en cultivo, lo que permite el estudio in vitro del comportamiento fisiológico y la capacidad fotorreceptora de las CGRs. En el presente trabajo se caracterizó a cultivos primarios de células ganglionares mediante inmunocitoquímica para distintos marcadores específicos tales como GAP-43, neurofilamentos de 200 kDa y mediante hibridación in situ con sondas para thy-1 y para rodopsina. La purificación de CGRs se basó en la técnica de inmunopanning, para la cual generamos en el laboratorio anticuerpos específicos contra una glicoproteína de membrana Thy-1. También se utilizaron anticuerpos comerciales, a modo de control positivo de nuestros estudios. De esta forma, se obtuvieron células ganglionares altamente purificadas de acuerdo a los marcadores específicos. Estas células son sincronizadas a tiempo 0 por cambio de medio, y utilizando rodopsina, marcador específico de células fotorreceptoras, se encontró que menos del 10% de las células en cultivo son otras distintas de células ganglionares. Con estos hallazgos se puede concluir que estos cultivos primarios son altamente enriquecidos en células ganglionares, permitiendo la continuidad de los estudios arriba mencionados.