Estudio comparativo de cultivos CGRs de pollos de genotipos Salvaje y GUCY*1

NIETO PAULA S; GUIDO MARIO E

Mar del Plata, Argentina

Congreso; Congreso Conjunto de Sociedades Biomedicas; 2004

La retina es un oscilador del sistema circadiano de vertebrados que regula y sincroniza los ritmos biológicos diarios. En mamíferos la sincronización por luz persiste en ausencia de las células fotorreceptoras (CFRs), sugiriendo que los mecanismos de fotorrecepción visual clásicos y circadianos siguen vías diferentes. En este contexto, las células ganglionares (CGRs) tendrían un protagonismo especial ya que un grupo de CGRs es sensible a la luz. Una herramienta clave para realizar estudios sobre los mecanismos de fotorrecepción y regulación circadiana son los modelos de degeneración retiniana, como el GUCY1* en pollos (llevan una mutación en el gen de la Guanilato Ciclasa, que impide la fototransducción visual y provoca la degeneración de CFRs). Se desea investigar a las CGRs como osciladores circadianos autónomos y fotosensibles en embriones de pollos de 8 días de genotipos salvajes (WT) y GUCY*1, para lo cual planteamos como primer objetivo la caracterización de estos cultivos. En el estadio embrionario E8 las únicas células diferenciadas en las retinas de pollos son las CGRs. Esto nos permitió desarrollar el método de inmunopaning y purificar CGRs de pollos de ambos genotipos con anticuerpos que reconocen la proteína Thy-1 presente en las CGRs en este estadio. Las CGRs-Thy-1+ se cultivaron durante 1 día observándose en ambos grupos una notable formación de procesos. La caracterización mediante inmunocitoquimica y Western Blot utilizando marcadores específicos (Rodopsina Quinasa para CFRs, Parvalbúmina para células de la capa nuclear interna y Gap-43 para CGRs), revelan algunas similitudes entre ambos genotipos en la morfología celular y en el alto nivel de pureza de los preparados: mas del 90 % de las células fueron positivas para Gap-43 mientras que las células positivas para Parvalbúmina no superan el 8% y menos del 2,5 % fueron positivas para Rodopsina Quinasa.