SRC PARTICIPA EN LAS ALTERACIONES COLESTÁSICAS INDUCIDAS POR ESTRADIOL-17ß- D-GLUCURÓNIDO (E17G) EN DUPLAS AISLADAS DE HEPATOCITOS DE RATA (DAHR) A TRAVÉS DE LA VÍA REα-EGFR

BAROSSO, ISMAEL R.; MISZCZUK, GISEL S.; ZUCCHETTI, ANDRÉS E.; TABORDA, DIEGO; CROCENZI, FERNANDO A.; SÁNCHEZ POZZI, ENRIQUE J

Mar del Plata

Congreso; LIX REUNIÓN CIENTÍFICA ANUAL Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2014

SAIC-SAI

Previamente, se demostró que REα precede a EGFR en las alteraciones colestásicas producidas por E17G en DAHR. SRC interactúa con EGFR y REα en modelos experimentales que utilizan estradiol no conjugado, por lo que el objetivo del trabajo fue evaluar si SRC actúa como efector en las acciones de E17G. DAHR fueron pretratadas con dos inhibidores específicos de SRC: PP2 (5µM) y el inhibidor de SRC 1 (IS,1µM) durante 15 min y luego se trataron con E17G (100µM) por 20 min. Además, preparados de DAHR fueron coincubados con IS junto con ICI182,780 (ICI, inhibidor de REα, 1µM) por 15 min previo a la exposición a E17G. Finalmente, se expusieron a colilglisilamido fluoresceína (CGamF, sustrato de Bsep) o clorometilfluoresceína diacetato (GS-MF, sustrato de Mrp2) para estudiar la actividad de Bsep y Mrp2. Por microscopía de fluorescencia se determinó el % de acumulación vacuolar canalicular (Avc) de ambos sustratos. Las fosforilaciones (activaciones) de REα, EGFR y SRC se evaluaron por Western blot. Resultados: Se expresan como media±ES y con respecto al Control (C). PP2 y IS protegieron parcialmente la disminución de AVc de CGamF (E17G+PP2: 67±3%*, E17G+IS: 68±3%*, E17G: 51±3%^) y GS-MF (E17G+PP2: 69±4%*, E17G+IS: 71±10%*, E17G: 52±4%^) inducida por E17G. No se observó un efecto preventivo aditivo cuando DAHR se coincubaron con ICI (AVc CGamF: E17G+ICI: 66±2%*, E17G+ICI+IS: 67±3%*; AVc GS-MF: E17G+ICI: 70±5%*, E17G+ICI+IS: 69±4%*). n=4, ^ Diferencia significativa con C (p