OBTENCIÓN Y CARACTERIZACIÓN DE UNA MUTANTE DE Trypanosoma brucei CARENTE DE LA METALOCARBOXIPEPTIDASA TBMCP-1

FRASCH, ALEJANDRA PAULA; BOUVIER, LEÓN ALBERTO; NIEMIROWICZ, GABRIELA TERESA; CAZZULO, JUAN JOSÉ

Rosario

Encuentro; XXVI Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Protozoología y Enfermedades Parasitarias; 2013

Sociedad Argentina de Protozoología

Las metalocarboxipeptidasas de la familia M32 o de la carboxipeptidasa Taq se encuentran filogenéticamente restringidas a organismos procariotas. Una excepción a esta regla la constituyen los miembros de la familia Trypanosomatidae y algunas algas verdes, en cuyos genomas, este tipo de enzimas han sido identificadas. Trypanosoma brucei, agente causal de la enfermedad del Sueño, codifica una enzima de esta familia, la TbMCP-1. Dicha proteína fue expresada en forma recombinante y caracterizada bioquímicamente en nuestro laboratorio. La misma es una enzima citosólica, la cual se expresa tanto en el estadio procíclico como en el estadio sanguíneo del parásito. Hasta la fecha, la(s) función(es) de las enzimas de la familia M32 no han sido determinadas. En un intento por evaluar la potencialidad de este grupo de enzimas como blanco de drogas, hemos delecionado ambos alelos del gen TbMCP-1 mediante doble recombinación homóloga, obteniéndose trypomastigotes procíclicos de la cepa Lister 427 mutantes nulos para la misma. Si bien estos parásitos knock-out resultaron viables en cultivo, los mismos presentaron una disminución de la tasa de crecimiento. La evaluación de la relación núcleo/kinetoplasto, por otra parte, se vio alterada, evidenciándose la aparición de zooides, y especies con un número mayor de núcleos que de kinetoplastos. Estos defectos estarían sugiriendo la participación de TbMCP-1 en el proceso de división y/o control del ciclo celular. En particular, estos estudios no solo constituyen la primera aproximación al conocimiento de las funciones de esta familia de enzimas en este tipo de parásitos, sino que también representan la primera evidencia del papel que podrían desempeñar las carboxipeptidasas de la familia M32 en un organismo.